Молекулярно-генетическая характеристика возбудителей фасциолёза - Fasciola hepatica (Linnaeus,1758) и F. gigantica (Cobbold,1855)

• Автор: Гуляев, Андрей Сергеевич
• Шифр специальности: 03.02.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 170 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Введение

1. Обзор литературы

1.1. Особенности биологии и экологии, эволюция и

происхождение сосальщиков рода [''ахс'ю1а

1.2. Фасциолициды и проблема резистентности фасциол

к антигельминтным препаратам

1.3. Структура и состав митохондриального генома

трематод

1.4. Молекулярно-генетические методы, применяемые

для исследования трематод

1.5. Исследования генов рДНК Д.кераИса
1.6. Исследования митохондриального генома фасциол
1.7. Исследования ядерных белок-кодирующих генов
фасциол
2. Собственные исследования
2.1. Материалы
2.2. Методы
2.2.1. Фиксация образцов и выделение ДНК
2.2.2. Подбор праймеров
2.2.3. Полимеразная цепная реакция
2.2.4. Элюция и секвенирование
2.2.5. Клонирование
2.2.6. Статистическая и биоинформатическая обработка
результатов
2.3. Результаты исследований
2.3.1. Характеристика полиморфизма белок-кодирующих
локусов митохондриального генома фасциол

2.3.2. Филогенетический анализ локусов пасії и сох!
Р.керсіїіса из разных частей ареала
2.3.3. Филогенетические реконструкции с использованием последовательностей генов
РаэсШа ьрр. из открытых источников
2.3.4. Характеристика митохондриального генома
Р.кераПса и F.gigantica
2.3.5. Внутри- и межвидовой полиморфизм транспортных
РНК мт-генома печеночных сосальщиков
2.3.6. Структура, полиморфизм и филогенетический
анализ генов тубулина-р2 (ШЪЪ2)
3. Обсуждение
Выводы
Практические предложения
Список литературы

Введение
Актуальность проблемы. Фасциолез является одним из опасных гельминтозов животных и человека. В мире до 17 миллионов человек заражено фасциолёзом и ещё 250 миллионов находятся под угрозой заражения (Robinson and Dalton, 2009). Инвазированность жвачных животных фасциолами в отдельных регионах России достигает 80%, глобальные потери сельского хозяйства от фасциолёза, оцениваются в три миллиарда долларов (Горохов, 1986; Вогау, 1994; Архипов, 1999; Лошкарева, 2005).
Для борьбы с фасциолезом применяются антигельминтики из класса салициланилидов и бензимидазолов. Известны случаи возникновения резистентности фасциол к действию препаратов обеих групп, причины которой пока еще полностью не раскрыты (Fairweather, 1999; Miller et al., 1994; Gaasenbeek, 2000; Jackson, 2000; Robinson, 2002).
Ядерные и митохондриальные ДНК интенсивно используются для изучения родственных взаимосвязей и динамики генетических процессов в популяциях, описания структуры вида и истории его возникновения. Общебиологический интерес представляют процессы систематики и филогении трематод, взаимодействия паразита с окружающей средой, в качестве которой выступает не только комплекс природных абиотических факторов, но и сам организм животного-хозяина.
Все эти результаты свидетельствуют о высокой генетической неоднородности популяций сосальщиков двух видов в разных частях мирового ареала. Частичные последовательности мт-генов nadl и coxl были успешно использованы для дифференциации западно-азиатских и восточно-европейских популяций фасциол. На изученном ареале были

Рис. 3. Структура генов рДНК у эукариот
Консервативные гены 18S и 28S используются при сравнении родов и видов, но для выяснения внутривидовой структуры можно использовать только вариабельные регионы рибосомальных генов. Среди них наиболее часто используют внутренние транскрибируемые спейсеры 1 и 2 (ITS 1, ITS2) и D-домены (дивергентные области в 28S-и 18S-reHax) (Lotfy et al., 2008; Vala-Del Rio et al., 2007; Oison et al., 2003). В 2007 году проведены исследования региона D1 у видов типа Platyhelmintes. Были показаны отличия в нуклеотидных последовательностях внутри одного и того же класса, но в рамках более высоких таксонов обнаружена высокая филогенетическая однородность (Le et al., 2007). При исследовании локусов 28S, ITS1 и ITS2 у 19 видов семейства Fasciolidae, было показано монофилетическое (от единого предка) происхождение всех фасциолид. В сравнение включили F.hepatica, F.gigantica, F.jacksoni, Fascioloides magna, Parafasciolopsis fasciolaemorpha, Fasciolopsis buski, Protofasciola robusta и др. (Lotfy et al. 2008). Изучая полиморфизм фрагмента гена 28S, группа исследователей показала генетическую гетерогенность изолятов F.hepatica из Испании. SNP-анализ этих участков выявил внутривидовую вариабельность одного из сайтов (105 п.н.), которая объяснялась авторами различиями в чувствительности изолятов к антигельминтикам (Vara-Del Rio et al., 2007). Анализ последовательности локуса 28S рРНК в комбинации с ПДРФ-анализом