Выделение и свойства альфа-фетопротеина человека

• Автор: Томашевский, Андрей Юрьевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Место защиты: Б. м.
• Количество страниц: 111 с.

Оглавление
Введение

Раздел 1. ОБЗОР Литературы

1.1. Открытие АФП и его свойства

Иммунорегуляторные свойства АФП

1.2. Взаимодействие АФП с различными типами клеток

1.3. Стурктура и физико-химические свойства

1.4. Схемы выделения альфа-фетопротеина

Раздел 2. Материалы и методы.

2.1. Материалы

2.2. Методы исследования
2.2.1 Синтез аффиных сорбентов
2.2.2 Очистка альфа-фстопротеина
2.2.3 Электрофорез белков
2.2.4 Определение концентрации белков
2.2.5 Обработка модифицированного сахарозой АФП инвертазой
2.2.6 Удаление гидрофобных лигандов
2.2.7 Калориметрические измерения
2.2.8 Исследования флуоресценции
2.2.9 Спектры кругового дихроизма
3. Основные физико-химические методы
3.1 Круговой дихроизм
3.2 Сканирующая калориметрия
3.3 Флуоресцентная спектроскопия
3.4 Определение степени кооперативности переходов
Результаты и обсуждение
Глава 1. Схема очистки высоко гомогенного АФП
Глава 2. Исследование стабильности молекулы альфа-фетопротеина по
отношению к внешним воздействиям
Глава 3. Сравнение физико-химических характеристик АФП, выделенного
различными способами
Глава 4. а -фетопротеин связывает сахарозу специфически
Глава 5. Сравнение свойств гомологичных белков
сывороточного альбумина и АФП
Заключение
Выводы
Список литературы
Приложение: Обозначении и сокращении

Введение
Данная работа посвящена разработке метода выделения и изучению некоторых физико-химических свойств альфа-фетопротеина человека. Исследование свойств данного белка представляет собой актуальную задачу, лежащую на стыке различных областей биологической науки, поскольку понимание механизма функционирования исследуемого белка может стать ключом к решению ряда проблем современной иммунологии, эмбриологии и онкологии. АФП -выполняет в организме ряд важных функций, основными из которых, являются транспортная и иммуннорегуляторная. АФП единственный известный на сегодняшний день специфический переносчик ненасыщенных жирных кислот, в частности арахидоновой, которая является основным соединением при синтезе простагладнинов и лейкотриенов. В норме максимальная концентрация АФП (5-7мг/мл) обнаруживается в сыворотке плода. В сыворотке взрослого организма обычная концентрация АФП менее 5 нг/мл. Однако его уровень возрастает до 1-3 мг/мл при развитии различных патологий в частности гепатом, тератокарцином.
Как видно из выше изложенного, роль АФП в организме существенна. В связи с этим данный белок интенсивно изучается с момента его обнаружения по настоящее время. Однако по ряду объективных причин (сложность очистки, выраженная микрогетерогенность) структурные, физико-химические свойства и молекулярный механизм его функционирования в организме до конце не изучены.
Целью данной работы являлось разработка высоэффективной схемы очистки АФП и изучение ряда его физико-химических
свойств. Для решения данной задачи применялся ряд современных физико-химических методов, позволяющих получать сведения о структуре белковой молекулы, таких как круговой дихроизм, флуоресцентная спектроскопия, сканирующая микрокалориметрия и другие.
В результате проведенных исследований была разработана оригинальная схема высокоэффективной очистки данного белка. Определены границы стабильности АФП по отношению к внешним воздействиям. Обнаружено не описанное ранее свойство АФП специфически связывать сахарозу. Установлено, что удаление природных лигандов приводит к необратимой потере белком уникальной третичной структуры и переходом в состояние расплавленной глобулы.
Следует отметить что, кроме возможного прикладного значения, исследование физико-химических свойств сложного по своей структуре белка а-гликопротеина, несущего на себе разнообразные лиганды - является с нашей точки зрения, само по себе интересной задачей в области физико-химии белка и дополняет наши знания о структуре и возможных свойствах белковых молекул.
Диссертационная работа состоит из введения, обзора
литературы, раздела “Материалы и методы”, пяти глав в которых описаны основные результаты иследований, заключения, выводов и списка литературы. Во введении дано краткое описание задач и результатов исследования. Обзор литературы посвящен описанию и анализу литературных данных, касающихся схем выделения, физико-химических и биологических свойств, онко-эмбрионального

молекул растворителя и т.д. Все эти изменения могут влиять как на квантовый выход, так и на длину волны флуоресценции. Таким образом, флуоресцентная спектроскопия является
высокочувствительным методом, позволяющим получать данные об окружении хромофоров в молекулах.
В белках существует три типа собственных флуоресцирующих хромофоров - это ароматические аминокислотные остатки триптофан, тирозин и фенилаланин, каждый из которых имеет собственные длины волн поглощения и испускания. На практике имеет смысл говорить не о длинах волн, а о спектрах флуоресценции (спектр испускания флуоресценции и спектр возбуждения флуоресценции), то есть о зависимости интенсивности флуоресценции от длины волны. В белковых молекулах, содержащих триптофан, обычно наблюдают за триптофановой флуоресценцией, имеющей наибольший квантовый выход. Флуоресценция тирозина в свободном состоянии может иметь квантовый выход, сравнимый с флуоресценцией триптофана, однако в белках флуоресценция тирозина обычно сильно тушится из-за его ионизации или расположенных рядом аминогруппы или карбоксильной группы.