Характеристика микрофлоры наружного слухового прохода у собак при отитах

• Автор: Акжигитов, Абай Сарсенгалиевич
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Оренбург
• Количество страниц: 126 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1 РОЛЬ МИКРООРГАНИЗМОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ НАРУЖНОГО ОТИТА У СОБАК И ХАРАКТЕРИСТИКА ИХ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1Л Этиология наружного отита у собак
1.2 Патогенные свойства микроорганизмов, вызывающих наружные отиты у собак
1.3 Секретируемые факторы персистенции условно-патогенных микроорганизмов
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Выделение и идентификация микроорганизмов
2.2 Методы определения биологических свойств грибов рода Malassezia
2.3 Методы определения факторов персистенции микроорганизмов
2.4 Методика совместного культивирования грибов рода Malassezia и бактерий рода Staphylococcus
2.5 Метод определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам
2.6 Методы статистической обработки результатов
3 ВИДОВОЙ СОСТАВ МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ СОБАК С НАРУЖНЫМИ ОТИТАМИ
4 ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ГРИБОВ РОДА MALASSEZIA В МИКРОБИОЦЕНОЗЕ НАРУЖНОГО СЛУХОВОГО ПРОХОДА СОБАК
4.1 Факторы вирулентности и персистенции грибов рода Malassezia, выделенных при отитах
4.2 Чувствительность к антимикотикам грибов рода Malassezia, выделенных при отитах
5 ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ БАКТЕРИЙ В МИКРОБИОЦЕНОЗЕ НАРУЖНОГО СЛУХОВОГО ПРОХОДА СОБАК
5.1 Факторы персистенции бактерий, выделенных при отитах
5.2 Чувствительность к антимикробным средствам бактерий, выделенных при отитах

6 ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ МЕЖМИКРОБНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ М. PACHYDERMATIS И БАКТЕРИЙ РОДА STAPHYLOCOCCUS
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ УКАЗАТЕЛЬ

ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы
Наружные отиты являются одной из самых распространенных патологий у собак (Oliveira L.C., 2008; Lehner G., 2010; Linek M., 2011). Их возбудителями могут быть бактерии, дрожжеподобные и плесневые грибы, а также грибковобактериальные ассоциации (Овчинников P.C. с соавт., 2013). Нередко заболевание переходит в хроническую форму, а его длительность достигает трех и более лет (Ершов П.П., 2008). Существенный вклад в длительное переживание микроорганизмов в организме хозяина вносят секретируемые факторы персистен-ции. Известно, что микроорганизмы способны инактивировать механизмы естественной противоинфекционной резистентности макроорганизма, такие как лактоферрин, катионный белок тромбоцитов, лизоцим, карнозин (Бухарин О.В., 1999, 2006).
Однако, у микроорганизмов, выделенных при наружных отитах у собак, изучена лишь антилизоцимная активность (Пензурова С.А. с соавт., 2012).
В патогенезе отитов у собак значимую роль играют симбионтные взаимоотношения микроорганизмов, колонизирующих наружный слуховой проход (Ершов П.П., 2008). В условиях микробных ассоциаций между ними могут возникать неоднозначные взаимоотношения, что оказывает существенное влияние на течение инфекционного процесса (Долгушина В.Ф., Долгушин И.И., 2004; Karagozov I. et al., 2004). В подобных ситуациях многими исследователями (Вахитов Т.Я., 2007; Семенов A.B., 2009; Yang Y.L., 2003; Dubuis Ch., Haas D., 2007) существенным признается определение у выделенных культур факторов патогенности и персистенции и оценка характера взаимоотношений, складывающихся между сочленами микробных сообществ в том или ином биотопе.
Исследования последних лет направлены на решение вопросов, связанных с оптимизацией тактики лечения отитов, поскольку эмпирическое применение рекомендуемых антибактериальных препаратов зачастую не дает желаемого эффекта в борьбе с патогенными микроорганизмами и проблема их устойчивости приобретает все большую значимость (Cafarchia C. et al., 2012;

лизиса суспензии тест-культуры рассчитывали антилизоцимную активность исследуемой культуры по формуле:
л У1с^-щгщ)

где А - антилизоцимная активность, мкг инактивированного лизоцима/мл супернатанта;
V] - объём (0,1 мл) раствора лизоцима исходной концентрации (20 мкг/мл);
У2 - объём (0,9 мл) супернатанта бульонной культуры исследуемого штамма;
С - исходная концентрация лизоцима (20 мкг/мл);
У - оптическая плотность бульонной культуры исследуемого штамма, ед. оптической плотности;
ДБ0 - изменение оптической плотности суспензии тест-культуры в опыте между 30 и 150 с;
ДВК - изменение оптической плотности суспензии тест-культуры в контроле между 30 и 150 с.
Антилизоцимную активность выражали в мкг/мл*ОП.
Антицитокиновую активность (АДА) микроорганизмов определяли по методу О.В. Бухарина с соавт. (2011). Изучение способности микроорганизмов вызывать изменение концентрации про- (ИФН-у, ИЛ-8) и противовоспалительных цитокинов (ИЛ-4) проводили путем соинкубирования супернатантов бактерий и грибов с рекомбинантными цитокинами в соотношении 1:1 (опытные пробы). В качестве контроля использовали раствор цитокинов, внесённый в бульон Ьеет^-Мойпапп (для грибов) и мясо-пептонный бульон (для бактерий). Конечная концентрация цитокинов в опытных и контрольных пробах составляла для ИФН-у - 143 пг/мл, ИЛ-4 - 14 пг/мл, ИЛ-8 - 36 пг/мл. Опытные и контрольные пробы инкубировали в течение 2 часов при 37 °С, реакцию останавливали на холоду и отбирали супернатант. Определение концентрации цитокинов в опытных и контрольных пробах проводили иммуноферментным методом с использованием наборов реагентов ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), учет результатов проводили на фотометре БТАТ БАХ 2100 (США) при длине