Транспозонный мутагенез и характеристика гена арабидопсиса, контролирующего срастание органов, их опушение и состав жирных кислот

• Автор: Ефремов, Александр Алексеевич
• Шифр специальности: 06.01.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Краснодар
• Количество страниц: 153 с.

Памяти
Евгения Григорьевича Жирова, у которого я учился

СОДЕРЖАНИЕ С.
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Функции покровных клеток растительных меристем и органов
1.2. Структура меристем побега двудольных растений, дифференциация клеток и морфогенез
1.3. Дифференциация клеток эпидермиса при формировании
женских органов цветка
1.4. Мутанты растений, имеющие сращивание и слипание органов
1.5. Ипсерциоиный мутагенез при изучении развития растений
1.6. Транспозонное мечение генов и методы клонирования
2. УСЛОВИЯ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Растительный материал и условия проведения опытов
2.2. Лабораторные материалы
2.3. Методы исследований
2.4. Меры безопасности
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Разработка метода демонстрации инсерций транспозонов (ДИТ)
3.2. Клонирование гена ЕЮОЬЕНЕАО (ЕОН) арабидопсиса
3.3. Молекулярная характеристика аминокислотной последовательности белка ГОН
3.4. Анализ экспрессии гена ГОЯ
3.5. Супрессия дифференциации трихом у мутанта /ей
3.6. Характеристика и практическое использование промотора
гена ГОЯ арабидопсиса
3.7. Экспрессия гена ГОЯ в семенах трансгенных растений арабидопсиса

3.8. Ген ГОЯ: связь биосинтеза жирных кислот, дифференциации клеток и морфогенеза
3.9. Перспективы практического использования гена ГОЯ
в селекции масличных культур
ВЫВОДЫ
РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКИ
СП ИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

содержащих автономные транспозоны кукурузы En/Spm /156/. Мутант fiddlehead /94/, несущий аллель fdh-1, был получен от Сьюзан Лолле (Гарвардский университет, США).
Условия выращивания растений. Растения арабидопсиса выращивались в теплицах или ростовых камерах на длинном дне (16 часов, освещённость 20 тыс. люкс) и влажности воздуха 60 %. Температура в теплицах была 22-25°С днём и 20°С ночью. Мы обнаружили, что снижение температуры улучшает рост арабидопсиса, поэтому в ростовых камерах температура поддерживалась 18°С днём и 16°С ночью. Трансгенные растения, в том числе имеющие в своём геноме транспозоны, выращивались в специальных теплицах для трансгенных растений или ростовых камерах.
Растения выращивались в пластиковых сосудах диаметром 10 или 15 см или в ячеистых пластиковых поддонах с ячейками 10x10 см. Почвенная смесь приготавливалась персоналом теплицы из торфа, вермикулита, перлита и извести взятых в соотношении 5:1:1:0.05.
2.2. Лабораторные материалы
Штаммы бактерий, векторы и клоны. Штамм DH10B (F mcrA D(тгг-/ю/RMSmcrBC) fSOd/ncZDYT 15 DZacX74 end AI recAl deoR D (ara, leu)7697 oraDJ.39 gall] galK nupG rpsL) использовался для выращивания плазмид в бактериях кишечной палочки (Escherichia coli) /96/ при клонировании и для препаративного выделении ДНК. Плазмиды серии pBluescriptKS (Stratagene) и их производные использовались для рутинного клонирования фрагментов ДНК и отбора рекомбинантных клонов при помощи «-комплементации в штамме кишечной палочки DH10B. Штамм кишечной палочки К803 (F-galK2, ga/T22, hsdS3 (г t , in k ). lacYl, mcrA , mcrB , metBl, mrr + , ,шрЕ44 lambda-) использовался для выращивания геномной библиотеки арабидопсиса, сделанной Дж. Муллиган и Р. Давис (Стэнфордский университет, США) в векторе бактериофага 2.GEM11, и выделенных