Особенности токсинообразования у гриба Fusarium poae (Peck) Wollenweber, распространенного в зернофураже

• Автор: Токарев, Сергей Викторович
• Шифр специальности: 16.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 104 с. : ил.

Содержание

Введение

Обзор литературы

Глава 1. Токсигенные грибы рода Fusarium

1.1 Методология изучения популяций

1.2 Современные подходы к систематике

Глава 2. Фузариотоксины трихотеценового ряда

2.1 Строение и биологическая активность

2.2 Методы анализа культур грибов

Глава 3. Характеристика гриба Fusarium роае
3.1 Биологические особенности
3.2 Причастность к фузариотоксикозам
3.3 Токсичные метаболиты
Собственные исследования
Глава 4. Материалы и методы
4.1 Объекты исследования
4.2 Условия культивирования грибов
4.3 Анализ культур на содержание фузариотоксинов
4.4 Синтез белковых конъюгатов диацетоксисцирпенола
4.5 Индукция антител и их характеристика
Глава 5. Результаты исследований
5.1 Разработка ИФА диацетоксисцирпенола
5.1.1 Получение и тестирование иммунореагентов
5.1.2 Оптимизация условий анализа
5.2 Токсигенный потенциал региональных популяций Fusarium роае
5.2.1 Диацетоксисцирпенол и Т-2 токсин
5.2.2 Ниваленол и фузаренон X
5.2.3 Зеараленон

5.3 Видовые особенности биосинтеза трихотец-9-енов
5.3.1 Р.роае и другие распространенные возбудители фузариоза
5.3.2 Локализованные и редко встречающиеся виды
Обсуждение результатов исследований
Выводы
Практические предложения
Список литературы
Список сокращенных обозначений
Приложение

Введение
Актуальность темь!. Одним из важнейших условий успешного развития животноводства является обеспеченность хозяйств зерновыми кормами высокого санитарного качества. Загрязненность зернофуража токсинами, которые образуют грибы рода Fusarium, приводит к значительному экономическому ущербу, поскольку в последние годы поражение злаковых культур фузариозом отмечается в нашей стране практически повсеместно. В отдельные периоды, особенно в условиях повышенной влажности и температуры, заболевание способно приобретать характер эпифитотий. В разных эколого-географических зонах отмечено формирование специфической по составу фузариозной инфекции зерна, в которой, как правило, среди доминирующих патогенов встречается гриб F. роае (Peck) Wollenweber (7, 15, 21, 30).
Этот вид, обладающий экологической пластичностью, признаками резкой изменчивости и сложным биологическим статусом, в последние годы привлекает все большее внимание микотоксикологов. Его присутствие в зерне связывают с такими масштабными и эндемическими интоксикациями человека и животных как острый геморрагический синдром, алиментарнотоксическая алейкия, болезнь Кашина-Бека и др. (91, 171). Зарубежные исследователи неоднократно высказывали предположение о том, что токсигенность F. роае может быть связана с активным биосинтезом метаболитов трихотеценового ряда - диацетоксисцирпенола и ниваленола, которые являются близкими структурными аналогами таких широко известных фузариотоксинов как Т-2 токсин и 4-дезоксиниваленол (31, 110, 134, 154).
Тем не менее, подробный анализ мировых данных литературы за период с 1960 по 2005 гг. показывает, что сведения относительно токсигенного потенциала F. роае остаются весьма противоречивыми, а свойства природных популяций этого вида практически не исследованы.

(М+Ыа)+

(МЖ)Т

340 360 ЗЕО 400
(т/г)
440 460 480 500
(т/г)
Рис. 2. Масс-спектры лазерной десорбции ДАС (а) и гс-ДАС (б).
Продукт реакции в условиях ТСХ показал свойственную всем 12,13-эпокситрихотеценам реакцию на реагент Такитани, но при этом отличался от ДАС положительным ответом на присутствие в молекуле свободной карбоксильной группы. После обработки пластинки спиртовым раствором бромфенолового синего он окрашивался в желтый цвет на синем фоне. Сопутствующих веществ при просмотре пластинок в УФ не было обнаружено. В подвижных фазах, состоящих из апротонных растворителей -этилацетат-петролейный эфир, 3:1 и толуол-этилацетат-муравьиная кислота, 5:4:1, полученное вещество имело большую подвижность, чем ДАС и в системе этилацетат-петролейный эфир, 3:1 имело значение Кг 0,42 против
0,35. В подвижной ф'азе хлороформ-метанол, 9:1 наблюдалось обратное

соотношение значений Кг для этих веществ - продукт реакции имел

меньшую подвижность, чём ДАС и значение Кг 0,33 против 0,44 (рис. 3).