Изучение метаболома суспензионной культуры василистника малого (Thalictrum minus L.) - продуцента протобербериновых алкалоидов

• Автор: Тертичная, Юлия Михайловна
• Шифр специальности: 14.04.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 128 с. : 4 ил.

Автор приносит глубокую, искреннюю благодарность заслуженному деятелю науки, академику РАМН и РАСХН, профессору, доктору технических наук Быкову Валерию Алексеевичу за возможность выполнить работу на базе Всероссийского института лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР).
Выражает всему коллективу Всероссийского института лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) признательность за понимание и доброжелательное отношение.
Отдельное спасибо кандидату биологических наук Савиной Татьяне Алексеевне, доктору фармацевтических наук Мизиной Прасковье

Георгиевне, кандидату фармацевтических наук Савиной Аэлите

Алексеевне, кандидату технических наук Ворошилову Александру

Ивановичу, кандидату физико-математических наук Шейченко Владимиру Ивановичу и кандидату фармацевтических наук Цыбулько Наталье Степановне за помощь и поддержку при выполнении работы.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ПРОТОБЕРБЕРИНОВЫЕ АЛКАЛОИДЫ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1. Строение и свойства алкалоидов протобербериновой группы
1.2. Источники протобербериновых алкалоидов
1.2.1. Нативные растения - источники протобербериновых алкалоидов
1.2.2 Культура клеток и тканей растений — источник протобербериновых алкалоидов
1.3. Биосинтез берберина и протобербериновых алкалоидов в лекарственных растениях
1.4. Физико-химические свойства берберина
1.5. Биологическая активность алкалоида берберина и его производных
1.6. Применение в медицине ЛРС и препаратов на его основе, содержащих алкалоид берберин
1.7. Стандартизация исходного растительного сырья и способы извлечения из него алкалоида берберина
1.8. Проблема сохранения стабильности БАВ в лекарственном растительном
сырье
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Методы морфофизиологического исследования
2.2.2. Методы изучения ростовых свойств суспензионной клеточной культуры Thalictriim minus L. штамма Тт-2 — 05 ВИЛАР

2.2.3. Методы исследования режима сушки
2.2.4. Методы товароведческого анализа
2.2.5. Методы микроскопического анализа
2.2.6. Физико-химические методы исследования
2.2.7. Методы выделения индивидуальных веществ
2.2.8. Планирование экспериментов и методы статистической обработки
данных
ГЛАВА 3. МОРФОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ И БИОХИМИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ СУСПЕНЗИИ КЛЕТОК THALICTRUMMINUS I.
ШТАММА ТМ-2 - 05 ВИЛАР
3.1 Морф о физиологические исследования суспензионной клеточной
культуры Thalictrum minus L. штамма Tm-2 - 05 ВИЛАР
3.2. Изучение биосинтетической активности суспензионной клеточной культуры Thalictrum minus L. штамма Tm-2 — 05 ВИЛАР в режиме
периодического выращивания при длительном субкультивировании
ГЛАВА 4. ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПОДЛИННОСТИ СУСПЕНЗИОННОЙ КЛЕТОЧНОЙ КУЛЬТУРЫ THALICTRUM MINUS L. ШТАММА TM-2 - 05 ВИЛАР
4.1. Изучение фитохимического состава сухой биомассы Thalictrum minus L. штамма TM-2 - 05 ВИЛАР
4.1.1. Определение качественного состава основной группы БАВ в сухой клеточной культуре Thalictrum minus L. штамма TM-2 — 05 ВИЛАР
4.1.2. Идентификация алкалоида берберина методом тонкослойной хроматографии (ТСХ)
4.1.2.1. Идентификация алкалоида берберина в сухой биомассе Thalictrum minus L., штамм TM-2 - 05 ВИЛАР
4.1.2.2. Идентификация алкалоида берберина в культуральной жидкости
Thalictrum minus L. штамма TM-2 — 05 ВИЛАР
4.1.3. Спектральные характеристики алкалоида берберина, полученного из

концентрации в целом показали значительную эффективность, в случае с С. albicans противогрибковой активностью обладали кремы с 2 %, 5 % и 10% содержанием действующего вещества [160].
1.7. Стандартизация исходного растительного сырья и способы извлечения из него алкалоида берберина
При идентификации определенного алкалоида или группы определенных алкалоидов в сырье, проводят специфические реакции (цветные) и микрокристаллоскопические реакции. При рН<7, наблюдается образование осадков, характерных для алкалоидов: с раствором Люголя -бурый осадок, с пикриновой кислотой (при нагревании) — желтый, с кремневольфрамовой кислотой - белый хлопьевидный, с фосфорномолибденовой кислотой - бело-зеленый или сине-зеленый хлопьевидный осадок. Данный анализ не имеет каких-либо особенностей при его проведении с использованием клеточной биомассы и может быть использован в процессе установления подлинности сырья биотехнологического происхождения при контроле его качества [76].
Количественное определение берберина проводят гравиметрически или титриметрически с пикролоновой кислотой
(нитрофенилнитрометилпиразололы) [26, 61, 169].
Фотометрическое определение основано на взаимодействии берберина бисульфата с хромогенным органическим реагентом кислотного характера эозином (2,4,5,7-тетрабромфлуоресцеин) с образованием комплексного соединения. Окраска и оптическая плотность растворов берберина с эозином зависят от pH растворов, концентрации эозина, берберина и других факторов [33].
Для очистки извлечений, а также для разделения алкалоидов широко используется хроматографические методы - колоночная хроматография и