Сорбционно-хроматографическая очистка ДНК-азы и цитохрома С в технологии получения фармацевтической композиции

• Автор: Сальникова, Светлана Александровна
• Шифр специальности: 14.04.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 128 с. : 19 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 . Полимерные сорбенты и носители для выделения биологически активных

веществ

1.2. Полимерные сетчатые сорбенты, применяемые для сорбции

макромолекул

1.3. Макропористые сорбенты

1.4. Гетеросетчатые сорбенты

1.5. Макросетчатые сорбенты

1.6. Новые подходы к синтезу сорбентов

1.7. Особенности при использовании сорбционных методов при выделении и очистке белков
1.8. Виды хроматографических процессов. Ионообменная и гидрофобная
хроматография
1.9. Термодинамический и кинетико-динамический анализ сорбционных
процессов
1.10. Модификация биологически активных веществ
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Структура и свойства панкреатической дезоксирибонуклеазы
2.2. Структура и свойства цитохрома С
2.3. Физико-химические характеристики сорбентов
2.4. Физико-химические характеристики применяемых ПАВ
2.5. Носители для иммобилизации
2.6. Свойства хлоргексидина биглюконата
2.7. Определения концентрации белка по методу Лоури
2.8. Определение концентрации белка по методу с биуретовым реактивом
(связыванием с Кумасси синим)
2.9. Определение ферментативной активности ДНК-азы в растворе
2.10. Количественное определение цитохрома С
2.11. Гельхроматографический анализ
2.12. Метод определения концентрации хлоргексидинабиглюконата
2.13. Метод кислотно-щелочной обработки сорбентов
2.14. Модификация сорбентов
2.15. Методика по изучению комплексов с липосомами и гликосферами
2.16. Исследование сорбции белков в статических условиях (рН-
зависимость и изотермические процессы сорбции)
2.17. Исследование кинетики сорбции белков
2.18. Проведение процесса сорбции и десорбции в динамических условиях
2.19. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3 ИЗУЧЕНИЕ РАВНОВЕСНЫХ И КИНЕТИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ
СОРБЦИИ ФЕРМЕНТОВ НА РАЗЛИЧНЫХ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ НОСИТЕЛЯХ
3.1. Сорбция ферментов на ионогенных и молекулярном сорбентах с
модифицированной и немодифицированной поверхностью
3.2. Термодинамический анализ сорбции
3.3. Кинетический анализ сорбции
ГЛАВА 4 ИССЛЕДОВАНИЕ ДИНАМИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ СОРБЦИИ И
ДЕСОРБЦИИ
4.1. Теоретический анализ условий оптимизации. Изучение влияния
скорости подвижной фазы на процесс сорбции ферментов из многокомпонентной смеси
4.2. Изучение динамического процесса выделения цитохрома С на
сульфокатионитах КУ-23 и С
4.3. Изучение динамического процесса выделения ДНК-азы на
сульфокатионитах КУ-23 и С
4.4. Разработка гибкой технологической схемы выделения и очистки
цитохрома С и ДНК-азы на сульфокатионите КУ
ГЛАВА 5 МОДИФИКАЦИЯ ПАНКРЕАТИЧЕСКОЙ ДНК-АЗЫ С ЦЕЛЬЮ
СОЗДАНИЯ НОВЫХ ГОТОВЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ
5 Л. Изучение влияния антисептика, липосом и глигосфер на активность ДНК-азы
5.2. Изучение процесса связывания ДНК-азы с наноматериалами и хлоргексидином по кинетике диффузии через пористые мембраны
5.3. Изучение процесса связывания фермента с антисептиком
5.4. Изучение процесса связывания фермента с липосомами и гликосферами
5.5. Влияние гликосфер на стабильность активности ДНК-азы в растворе
5.6. Салфетки медицинские для обработки воспаленных участков кожи, слизистой, а также профилактики герпетических высыпаний «Герпестоп»108
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ
ПРИЛОЖЕНИЕ А АКТЫ АПРОБАЦИИ И ВНЕДРЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ... 131 ПРИЛОЖЕНИЕ Б ТУ 9393-021-01899876-2009 САЛФЕТКИ МЕДИЦИНСКИЕ ДЛЯ ОБРАБОТКИ ВОСПАЛЕННЫХ УЧАСТКОВ КОЖИ, СЛИЗИСТОЙ, А ТАКЖЕ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ГЕРПЕТИЧЕСКИХ ВЫСЫПАНИЙ
«ГЕРПЕСТОГІ»
ПРИЛОЖЕНИЕ В ЗАЯВКА НА ИЗОБРЕТЕНИЕ № 2013144910 ОТ 07.10.2013146

сорбента. Размеры гранул также влияют на эффективность препаративных процессов разделения. Массообмен между подвижной и неподвижной фазами в хроматографических колонках улучшается с уменьшением размера гранул. Однако, для промышленного разделения фракции с диаметром частиц <60 мкм малопригодны из-за сильного возрастания гидродинамического сопротивления рабочего слоя колонки потоку элюента [33].
Особое влияние на эффективность хроматографического разделения оказывает скорость подвижной фазы. Ухудшение эффективности хроматографии с увеличением скорости подачи раствора в колонку связано с явлением размывания и изменением величин удерживаемых объемов (для молекул с малой диффузионной подвижностью). Кроме того, с увеличением скорости продвижения хроматографических зон вдоль колонки увеличивается и неравновесность процесса. Такие неустановившиеся режимы в хроматографии стараются не использовать.
Однако, реализация квазиравновесных режимов часто затруднена из-за медленной скорости диффузии молекул БАВ (особенно белков, полисахаридов или их надмолекулярных комплексов) в фазе сорбента. Поэтому, переход к неравновесному (нерегулярному) режиму сорбции часто неизбежен, особенно при препаративной хроматографии, когда используются прочные, но малопроницаемые сорбенты и гели крупного зернения, обеспечивающие благоприятные гидродинамические условия и возможность работы при низких давлениях и относительно высоких скоростях подвижной фазы, что позволяет избегать инактивации лабильных БАВ [18].
Характерными признаками неравновесного (неустановившегося) движения хроматографической зоны являются:
- в элютивной хроматографии - наличие ярко выраженной асимметрии зоны, а также уменьшение удерживаемого объема с возрастанием скорости элюции, либо с укрупнением зерна пористого материала; уменьшение концентрации вещества в пике;