Комплекс молекулярно-биологических методик для скрининга рака шейки матки

• Автор: Куевда, Дмитрий Александрович
• Шифр специальности: 14.03.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 176 с. : 9 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКОЙ

МЕТОДИКИ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДНК ВИЧ ВКР

ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКОЙ

МЕТОДИКИ ГЕНОТИПИРОВАНИЯ ДНК ВПЧ ВКР

ГЛАВА 5. ОЦЕНКА ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ХАРАКТЕРИСТИК

МЕТОДИКИ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОЕ О ОПРЕДЕЛЕНИЯ И МЕТОДИКИ ДЛЯ ГЕНОТИПИРОВАНИЯ ДНК ВПЧ ВКР
ГЛАВА 6. АПРОБАЦИЯ МЕТОДИК ВЫЯВЛЕНИЯ,
КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ И ГЕНОТИПИРОВАНИЯ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ И ХАРАКТЕРИСТИКИ СЛУЧАЕВ НЕОПЛАСТИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИИ ШЕЙКИ МАТКИ ПРИ ОБСЛЕДОВАНИИ ЖЕНЩИН, ПРОХОДЯЩИХ ПРОФИЛАКТИЧЕСКИ ОСМОТР И СРЕДИ БОЛЬНЫХ ДЕРМАТО-ВЕНЕРОЛОГИЧЕСКОГО ПРОФИЛЯ
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы исследования Рак шейки матки (РШМ) занимает одно из ведущих мест в структуре онкологической заболеваемости женщин детородного возраста. Классическим методом профилактики рака шейки матки считается скрининговое обследование женщин, в основе которого лежит цитологическое исследование соскобов эпителия цервикального канала с целью выявления атипичных клеток. Основной сложностью качественной реализации данной схемы является относительно низкий уровень чувствительности выявления предраковых изменений, в среднем составляющий 58 % (вариация - от 20 % до 87 %) (Arbyn М. et al., 2006), большое количество неопределенных результатов (до 15 % ASCUS), снижающих специфичность исследования и требующих дополнительного тестирования (Nygard J. F. et al., 2003), а также высокий уровень субъективности при трактовке результатов (Подистов Ю. И. и соавт., 2003).
Вирусы папилломы человека (ВПЧ) - группа чрезвычайно распространенных и генетически разнородных вирусов, инфицирующих и поражающих эпителий кожных покровов (кожные типы ВПЧ) и слизистых оболочек ротовой полости и аногенитальной области (генитальные типы ВПЧ). Генитальные типы ВПЧ передаются преимущественно половым путем и через родовые пути от матери ребенку. Исход инфекции зависит от типа вируса. Низкоонкогенные генотипы ВПЧ (6, 11, 42, 43, 44, 73) связаны с остроконечными кондиломами и дисплазиями легкой степени. Высокоонкогенные генотипы (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68), наряду с остроконечными кондиломами и дисплазиями легкой степени, также ответственны за злокачественную трансформацию эпителия, приводящую к инвазивному раку (Zur Hausen, et al., 1994; Munoz N. et al).

Открытие этиологической роли вирусов папилломы человека (ВПЧ) высокого риска в развитии РШМ позволили предположить эффективность выявления вируса как нового подхода для скрининга рака шейки матки (Wright Т. et al., 2004; Cuzick J. et ah, 2008). По результатам исследований, методики выявления ДНК ВПЧ (ВПЧ-тесты) оказались существенно более чувствительными, воспроизводимыми и объективными для выявления предрака и рака шейки матки по сравнению с цитологическим анализом. Однако ввиду особенностей папилломавирусной инфекции (способность к спонтанной регрессии и элиминации вируса) специфичность тестирования, направленного на выявление поражений шейки матки на основе ВПЧ-тестов, может быть существенно ниже, чем у цитологического анализа (Arbyn М. et al., 2009; Saslow D. et al., 2012), приводя к их непригодности для скрининга РШМ. Необходимость оптимизации диагностической специфичности анализа при сохранении высокого уровня чувствительности стали приоритетной задачей развития и стандартизации ВПЧ-тестов.
Степень разработанности темы исследования В современной научной литературе активно обсуждается перспектива использования тестов, направленных на выявление ДНК ВПЧ для скрининга РШМ. Основное внимание уделяется стандартизации тестов и обеспечению оптимальных диагностических характеристик выявления
онкогинекологических поражений. Показано, что на соотношение чувствительности и специфичности теста оказывает влияние спектр выявляемых генотипов (выявление большего числа генотипов ведет к росту чувствительности и потере специфичности) (Munoz N. et al., 2004), а также выявляемая концентрация вируса: низкая концентрация не ассоциирована с наличием или прогрессией интраэпителиальных поражений, высокая, напротив, чаще ассоциирована с наличием диспластических поражений эпителия. (Snijers P. et al., 2003; Saslow D. et al., 2012). В 2009 году

излишнему количеству разрешающих диагностических процедур и дополнительной стигматизации пациенток (Kotaniemi-Talonen L. et al., 2005, Arbyn M. et al., 2009; Anttila A. et al., 2010). Относительно низкие показатели специфичности и прогностической значимости положительных результатов обусловлены тем, что у большинства женщин папилломавирусная инфекция носит транзиторный характер (Stout N. К. et al., 2008). В возрастной группе до 30 лет ВПЧ-тесты обычно не рекомендованы ввиду высокой частоты встречаемости и высокой частоты спонтанных элиминаций вируса (Dunnie Е. F. et al., 2007). Однако, среди женщин старше 30 лет показатель спонтанной элиминации вируса значительно ниже, чем среди подростков и молодых женщин, а, следовательно, возрастает прогностическая ценность ВПЧ теста (Wright Т. et al., 2001; Saslow D. et al., 2012). Кроме того, важную роль в повышении специфичности играет учет вирусной нагрузки и повторные тестирования через 6-12 месяцев (Snijers P. et al., 2003; Kjasr S. К. et al., 2010; Rositch A. F. et al., 2013). Важным аргументом сторонников использования теста на ВПЧ в первичном скрининге является также то, что высокая чувствительность и прогностическая значимость отрицательных результатов позволяют существенно увеличить интервал скрининга для женщин, у которых ВПЧ не выявлен (Dillner J. et al., 2008; Katki H. A. et al., 2011). В частности, в одном из исследований показано, что прижизненный риск развития РШМ для женщин в возрасте 40 лет и проходящих только цитологический скрининг раз в 3 года, составляет 0,69 %, при этом для женщин, проходящих скрининг с использованием двойного теста (цитология и выявление ДНК ВПЧ) раз в 5 лет, данный показатель ниже - 0,61 %. При двойном же тестировании с интервалом раз в 3 года - снижается до 0,39 % (Stout N. К. et al., 2008).