Антифибротический эффект и механизмы действия пегилированной гиалуронидазы и спиперона при пневмофиброзе (экспериментальное исследование)

• Автор: Резцова, Алена Михайловна
• Шифр специальности: 14.03.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 161 с. : 18 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Современные представления о патогенезе фиброза лёгкого

и механизмах регенерации альвеолярного эпителия

1.2. Гиалуроновая кислота и гиалуронидаза при пневмофиброзе

1.3. Пегилирование фармакологически активных молекул как направление создания эффективных лекарственных препаратов

1.4. Эффекты и механизмы действия спиперона

1.5. Заключение

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Материалы исследования
2.2. Реагенты
2.3. Экспериментальная модель
2.4. Введение препаратов
2.5. Дизайн исследования
2.6. Методы исследования
Глава 3. Результаты собственных наблюдений
3.1. Гистологическое исследование легких
3.1.1. Однократное и курсовое введение блеомицина
3.1.2. Влияние пегилированной гиалуронидазы на пневмофиброз
3.1.3. Влияние спиперона на развитие пневмофиброза
3.1.4. Влияние последовательного введения пегилированной гиалуронидазы и спиперона на развитие пневмофиброза
3.2. Иммунофенотипическое исследование мононуклеаров костного мозга, крови и легких

3.2.1. Влияние пегилированной гиалуронидазы и спиперона
на клетки гемопоэза
3.2.2. Влияние пегилированной гиалуронидазы и спиперона
на клетки мезенхимопоэза
3.3. Влияние пегилированной гиалуронидазы и спиперона на клональную активность мононуклеаров костного мозга, крови
и легких при пневмофиброзе
3.3.1. Недифференцированные гемопоэтические
колониеобразующие единицы (КОЕ-Н)
3.3.2. Смешанные (гранулоцито-эритроидно-
макрофагально-мегакариоцитарные) колониеобразующие единицы (КОЕ-ГЭММ)
3.3.3. Гранул оцитарные колониеобразующие единицы (КОЕ-Г)
3.3.4. Фибробластные колониеобразующие единицы при частично обратимом пневмофиброзе
3.4. Изучение влияния спиперона на длительные культуры мононуклеаров легких при частично обратимом пневмофиброзе
3.5. Исследование влияния спиперона на дифференцировку легочных МСК в клетки стромальных линий при частично обратимом пневмофиброзе
Заключение
Выводы
Список сокращений
Список литературы

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Идиопатический фиброз лёгкого (ИФЛ) является наиболее распространённой и преимущественно смертельной формой идиопатической интерстициальной пневмонии. Болезнь возникает в среднем или старшем возрасте и проявляется в рубцевании здоровой ткани лёгкого, что затрудняет дыхание больных. Больные после постановки диагноза живут не более 3-5 лет [Olson A.L., Swigris J.J., 2012]. В настоящее время в США 128000 американцев больны ИФЛ. Каждый год диагностируется 48000 новых случаев и 40000 ежегодно умирают от этой болезни. Эпидемиологическая обстановка в РФ имеет схожий тренд [Фещенко Ю.И., 2005]. Этиология этого хронического и прогрессирующего заболевания недостаточно полно изучена, хотя такие факторы риска, как курение и воздействия окружающей среды, описаны в литературе [Denham J.W., Hauer-Jensen М. 2002; Kelly B.G., et al. 2002]. За последние 10 лет были достигнуты существенные успехи в понимании патогенеза ИФЛ. Акцент с преимущественно провоспалительной компоненты сместился в сторону фибробластического процесса, нефизиологического ремодулирования тканей, чрезмерного накопления белков внеклеточного матрикса (коллагена) и ангиогенеза [Loomis-King Н. et al., 2013].
На протяжении последних трёх десятилетий в эксперименте на различных моделях пневмофиброза были изучены противовоспалительные и антифибротические свойства более 240 соединений [Moeller A. et al., 2006; Degryse A. L., Lawson W. E., 2011]. Подавляющее большинство из них эффективны в профилактическом режиме введения и только 5% испытаны в условиях развёрнутой фазы болезни. Уверенности в том, что прошедшие отбор доклинических исследований соединения успешно пройдут клинические испытания, нет. В настоящее время только один терапевтический агент

сигналинг вследствие взаимодействия с рецептором CD44 [Ito T. et al.,2004]. Так в эксперименте было показано, что угнетение синтеза ГК приводит к отмене TGF-ß-опосредованному фенотипическому преобразованию миофибробластов. Это указывает на ключевую роль ГК в фибробластно-миофибробластном переходе [Meran S., Thomas D., 2007]. Обнаруженные при фиброзе легких a-SMA-positive миофибробласты (Alpha-Smooth Muscle Actin) коррелируют с аномальным отложением экстрацеллюлярного матрикса и прогрессированием заболевания [Gabbiani G., 2003]. В тканях, эти миофибробласты появляются в результате активации и дифференцировки стромальных фибробластов, процесс, в котором TGF-ß непосредственно участвует. Стойкость миофибробластического фенотипа зависит от аутокринной генерации TGF-ß [Vaughan М.В. et al.,2000].
9. ГК улучшает рост культуры человеческих мезенхимальных стволовых клеток и способствует хондрогенной дифференцировки человеческих мезенхимальных стволовых клеток [Kavalkovich K.W. et al.,2002]. CD44 и ГК помогают МСК перейти к области повреждения в целях содействия регенерации тканей [Poulsom R., 2007].
10. ГК увеличивает объем и площадь поверхности для миграции клеток и клеточной активности, и способствует стимуляции рецептор-опосредованной клеточной пролиферации [Solis М.А. et al., 2012].
Повышение уровня ГК и продуктов ее разложения наблюдаются у животных при блеомицин-индуцированном фиброзе легких [Zhao H.W., Lu C.J., Yu R.J., Hou X.M., 1999; Dentener M.A., Vemooy J.H., Hendriks S., Wouters E.F., 2005]. После интратрахеального введения блеомицина производство ГК увеличивается в несколько раз, максимальный пик концентрации наступает с 7 по 10 день. Затем ГК выводится из интерстиция легких и это совпадает с накоплением коллагена. Продукты деградации ГК размером 10-500 кЕ)а накапливаются в лёгких и могут стимулировать экспрессию генов макрофагов и других воспалительных клеток in vitro.