Иммуносупрессивные и противоопухолевые фармакодинамические эффекты флавоноидов корней солодки

• Автор: Павлова, Светлана Ивановна
• Шифр специальности: 14.03.06
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 236 с. : 8 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. Материалы и методы исследования
1.1. Препарат флавоноидов корней солодки
1.2. Лабораторные животные
1.3. Клетки периферической крови человека
1.4. Клетки лимфоидных органов мышей
1.5. Клетки бронхоальвеолярной лаважной жидкости мышей
1.6. Клетки опухолевых культур и штаммов
1.7. Бактериальные штаммы
1.8. Методы оценки ростовых характеристик клеток in vitro
1.9. Методы оценки функциональной активности иммунокомпе-
тентных клеток in vitro
1.10. Моделирование иммунопатологических процессов Т- и В-
клеточной направленности на экспериментальных животных
1.11. Модели для оценки функциональной активности клеток-
эффекторов врожденного иммунитета in vivo
1.12. Моделирование злокачественного новообразования на экспериментальных животных
1.13. Статистическая обработка результатов
Глава 2. ВЛИЯНИЕ ФЛАВОНОИДОВ КОРНЕЙ СОЛОДКИ
НА АКТИВНОСТЬ ЛИМФОЦИТОВ ПРИ ИНДУКЦИИ
АДАПТИВНОГО ИММУННОГО ОТВЕТА IN VITRO 5
2.1. Флавоноиды - полифенолы растительного происхождения,
обладающие фармакологической активностью
2.2. Современные представления об адаптивном иммунном ответе и влиянии на него полифенольных соединений
2.3. Изучение влияния ФКС на ростовые характеристики (проли-
ферация, апоптоз) митоген-активированных мононуклеарных клеток in vitro
2.4. Влияния ФКС на секрецию цитокинов митоген-активирован-
ными мононуклеарами как показатель функциональной активности и популяционной дифференцировки лимфоцитов

Глава 3. ИЗУЧЕНИЕ МЕХАНИЗМОВ ИММУНОСУПРЕССИВ-НОГО ДЕЙСТВИЯ ФЛАВОНОИДОВ КОРНЕЙ СОЛОДКИ В МОДЕЛИ ИММУНОПАТОЛОГИЧЕСКОГО ПРОЦЕССА IN VIVO
3.1. Реакция контактной чувствительности - модель иммунопатологического процесса Т-клеточной направленности
3.2. Влияние ФКС на развитие отека уха у мышей в модели контактной чувствительности, индуцированной ДНФБ
3.3. Изучение механизмов ингибирования ДНФБ-индуцированной контактной чувствительности препаратом ФКС
Глава 4. ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ФЛАВОНОИДОВ КОРНЕЙ СОЛОДКИ В МОДЕЛЯХ ИММУНОПАТОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ Т- И В-КЛЕТОЧНОЙ НАПРАВЛЕННОСТИ IN VIVO
4.1. Изучение эффективности ФКС в экспериментальной терапии реакции трансплантат против хозяина у мышей
4.2. Изучение эффективности ФКС в модели респираторной аллергии, индуцированной овальбумином у мышей
Глава 5. ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ФЛАВОНОИДОВ КОРНЕЙ СОЛОДКИ НА НЕКОТОРЫЕ ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ КЛЕТОК-ЭФФЕКТОРОВ ВРОЖДЕННОГО ИММУНИТЕТА В МОДЕЛЯХ IN VITRO И IN VIVO
5.1. Влияние ФКС на способность нейтрофилов и моноцитов/макрофагов к активации и хемотаксису
5.2. Влияние ФКС на поглотительную способность нейтрофилов и моноцитов/макрофагов
5.3. Влияние ФКС на продукцию активных форм кислорода фагоцитами и их бактерицидную функцию
5.4. Влияние ФКС на течение экспериментального острого бактериального воспаления органов брюшной полости
Глава 6. ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ЭФФЕКТОВ ФЛАВОНОИДОВ КОРНЕЙ СОЛОДКИ
6.1. Влияние ФКС на пролиферацию опухолевых клеток различной видовой и гистологической принадлежности in vitro
6.2. Исследование механизмов антипролиферативного противоопухолевого эффекта ФКС
6.3. Изучение противоопухолевого эффекта ФКС в модели in vivo

Глава 7. ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ И СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ФАРМАКОДИНАМИЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ ФРАКЦИЙ ПРЕПАРАТА ФЛАВОНОИДОВ КОРНЕЙ СОЛОДКИ
7.1. Хроматографический анализ и фракционирование ФКС
7.2. Сравнительная оценка фармакологических эффектов фракций суммы флавоноидов корней солодки
Глава 8. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.8.1.2. Оценка репликации ДНК
Для оценки влияния исследуемого препарата на клеточную пролиферацию использовался метод оценки репликации ДНК, основанный на включении радиоактивной метки (3Н-тимидин) в ДНК делящейся клеток. Для этого клеточную суспензию засевали в 96-луночный круглодонный (для клеток с суспензионным ростом) или плоскодонный (для клеток, прилипающих к подложке) планшет в конечной концентрации 0,2><106 (МНК человека), 10б(МНК мыши) и 5хЮ3-104 (опухолевые клетки) клеток/лунка в полной питательной среде. Клетки инкубировали при 37°С, 100% влажности и 5% содержании углеислого газа в окружающем воздухе.
Через 24 ч преинкубации МНК с оптимальными концентрациями митогенов в опытные лунки вносили препарат ФКС и продолжали инкубацию еще в течение 48 ч. За 16 часов до окончания культивирования в лунки добавляли радиоактивную метку (3Н-тимидин, конечная концентрация в лунке 5 мкКю/мл). После 24-часовой предынкубации опухолевой культуры 40 мкл среды в лунках заменяли на 20 мкл среды, содержащей 3Н-тимидин (конечная концентрация в лунке 1 мкКю/мл) и 20 мкл тестируемого агента, продолжая культивирование еще в течение 24 ч. Во всех случаях исследуемый препарат ФКС тестировали в диапазоне концентраций 0,1-20,0 мкг/мл (по 4 лунки на каждую концентрацию).
По истечении времени инкубации клетки из лунок собирали на автоматическом сборщике клеток (прилипающие к подложке клетки предварительно снимали смесью раствора Версена и 0,25% раствора трипсина), перенося радиоактивный материал на стеклянноволокнистые фильтры типа НА-930 (ЗАДтйпапп, Великобритания). Затем высушенные фильтры помещали во флаконы из кварцевого стекла, содержащие по 4 мл сцинтилля-ционного раствора (4 г 1-4-ди(5-фенил)-2-оксазолил бензола - РРО и 0,1 г 2,5-дифенилоксазола - РОРОР на 1 л толуола). Радиоактивность подсчитывали на счетчике (3-частиц. При оценке действия экспериментального