Роль полиморфных вариантов генов р53, CCR5, XRCC1 и XPD в патогенезе острого лимфобластного лейкоза у детей

• Автор: Сметанникова, Наталья Анатольевна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 136 с. : 8 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Острый лимфобластный лейкоз детского возраста

1.1.1. Эпидемиология острого лимфобластного лейкоза

1.1.2. Этиология острого лимфобластного лейкоза

1.1.3. Клональная теория острого лимфобластного лейкоза

1.1.4. Клиническая картина острого лимфобластного лейкоза

1.1.5. Классификация острого лимфобластного лейкоза

1.1.6. Диагностика острого лимфобластного лейкоза

1.1.7. Лечение острого лимфобластного лейкоза

1.2. Хромосомные аберрации при остром лимфобластном лейкозе у детей
1.3. Особенности показателей клеточного цикла и апоптоза бластных клеток при остром лимфобластном лейкозе
1.4. Роль полиморфных изменений генов, контролирующих деление клетки, апоптоз и эксцизионную репарацию ДНК, в канцеро- и лейкозогенезе
1.4.1. Влияние инактивации генар53 на генетический гомеостаз
1.4.2. Функциональное значение полиморфизмов генар
1.4.3. Роль хемокинового рецептора CCR5 в лимфоцитопоэзе
1.4.4. Влияние полиморфизма del32 bp на функциональный статус гена CCR
1.4.5. Участие гена XRCC1 в регуляции эксцизионной репарации оснований
1.4.6. Функциональное значение полиморфизма G28152A (Arg399Gln) в экзоне 10 гена XRCC
1.4.7. Участие гена XPD в регуляции эксцизионной репарации нуклеотидов

1.4.8. Функциональное значение полиморфизма А35931С (Ъуз75Ю1п) в экзоне 23 гена ХРО
1.4.9. Взаимосвязь р53-зависимого апоптоза и эксцизионной репарации ДНК в регуляции генетического гомеостаза
1.5. Потеря гетерозиготности по генетическим локусам при остром лимфобластном лейкозе детского возраста ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Общая характеристика клинических групп
2.2. Методы исследования
2.2.1. Выделение геномной ДНК из цельной периферической крови
2.2.2. Выделение геномной ДНК из мазков костного мозга
2.2.3. Анализ генных полиморфизмов методом полимеразной цепной реакции-полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПЦР- 55 ПДРФ)
2.2.4. Анализ гаплотипов интрона 3 и экзона 4 генар53 методом ПЦР— ПДРФ
2.2.5. Анализ гаплотипов интрона 3 и интрона 6 генар53 методом аллель-специфичной полугнездовой ПЦР
2.2.6. Определение гаплотипов экзона 4 и интрона 6 генар53 методом аллель-специфичной гнездовой ПЦР - ПДРФ-анализа продуктов 61 амплификации
2.2.7. Анализ полиморфизма конформаций однонитевых фрагментов (ЗБСР) экзона 7 генар
2.2.8. Секвенирование экзона/интрона 7 генар53
2.2.9. Исследование потери гетерозиготности генных локусов р53,

ССЯ5, XR.CC1 и ХРО у больных острым лимфобластным лейкозом
2.2.10. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Анализ частотного распределения индивидуальных полиморфизмов

генов р53, CCR5,XRCC1 и XPD в группах сравнения
3.1.1. Исследование потери гетерозиготности локусов геновр53, CCR5,

XRCC1 и XPD у больных острым лимфобластным лейкозом
3.1.2. Полиморфизм dup 16 bp (11951-11966) в интроне 3 гена/?53
3.1.3. Полиморфизм G12141C (Arg72Pro) в экзоне 4 генар53
3.1.4. Полиморфизм G13494A в интроне 6 генар53
3.1.5. Полиморфизм del32 bp в экзоне 3 гена CCR5
3.1.6. Полиморфизм G28152A (Arg399Gln) в экзоне 10 генаХ7?СС7
3.1.7. Полиморфизм А35931С (Lys751Gln) в экзоне 23 генаXPD
3.2. Анализ комбинаций полиморфизмов геновр53, CCR5,XRCC1 и

XPD в группах сравнения
3.2.1. Комбинации генотипов и гаплотипические сочетанияр53
3.2.2. Генотипические комбинациир53 и CCR5
3.2.3. Генотипические комбинациир53 и XRCC1
3.2.4. Генотипические комбинациир53 и XPD
3.2.5. Г енотипические комбинации XRCC1 и XPD
3.3. SSCP-анализ и секвенирование экзона/интрона 7 генар53

3.4. Связь клинических факторов прогноза и полиморфизмов генов р53, CCR5, XRCC1 и XPD с исходами терапии острого лимфобластного 86 лейкоза детского возраста
3.4.1. Влияние стандартных прогностических параметров на результаты

лечения острого лимфобластного лейкоза
3.4.2. Исходы терапии острого лимфобластного лейкоза у детей с различными полиморфными вариантами генов р53, ССР5, ХЛСС1 и 91 ХРП
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ СОБСТВЕННЫХ

ИССЛЕДОВАНИИ
4.1. Полиморфизмы генов р53, ССР5, ХРСС1 и ХРО при остром

лимфобластном лейкозе детского возраста
4.1.1. Полиморфизмы йир 16 Ьр (11951-11966, интрон 3), С12141С

крови больных раком легкого [36], EBV-трансформированные лимфобласты и лимфоциты здоровых доноров [182, 230], эмбриональные фибробласты и клетки кожной меланомы, клетки Saos2 [237, 238]). Отмеченная особенность объясняется предпочтительным связыванием Ащ72-несущих молекул с белком ВАХ и его аналогами [195, 231, 237].
В то же время Рго72-вариант р53 является более активным трансрегулятором генов Fas и р21 (WAF1). Это обусловлено его
повышенным сродством к вспомогательным белкам РНК-полимеразы II -TAFII32 и TAFII70 (TATA-box binding protein-associated factors), взаимодействие с которыми является необходимым условием функционирования р53 как фактора транскрипции [178, 214, 256].
Функциональное влияние ОНП G12141C сохраняется даже при качественном изменении биологических свойств гена р53 вследствие соматических мутаций. В частности, для аденокарциномы легкого показано, что Ал^72-содержащие мутантные белковые формы способны ингибировать р73-зависимый апоптоз клеток, в то время как аналогичная активность вариантов, несущих Рго72, существенно ниже либо не определяется [62, 84].
Благодаря своей биологической значимости полиморфизм экзона4 широко исследуется в качестве одного из маркеров индивидуальной генетической предрасположенности к развитию солидных опухолей. Так, многие авторы связывают возникновение HP V-позитивных карцином шейки матки, кожи, ротовой полости и пищевода с носительством аллеля G12141, объясняя данный факт сродством вирусного онкопротеина Е2 к Arg-содержащей форме белка р53 [56, 179, 181, 186, 188]. Менее активный вариант С12141, кодирующий Рго72, ассоциируется с развитием рака легкого, молочной железы и эндометрия [36, 55, 69, 87, 182, 244].
В то же время в ряде работ получены данные, не подтверждающие гипотезу о специфичности изоформ белка р53 для определенных новообразований [89, 209, 235, 238]. T.G. Kalemi и соавт. (2005) полагают, что активность обоих вариантов определяется природой апоптогенных