РОЛЬ БЕЛКОВ-РЕГУЛЯТОРОВ ПРОГРАММИРОВАННОЙ КЛЕТОЧНОЙ ГИБЕЛИ В РЕАЛИЗАЦИИ ПРОАПОПТОТИЧЕСКОГО ЭФФЕКТА ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛИ АЛЬФА НА ЛИМФОЦИТЫ КРОВИ

• Автор: Биктасова, Асель Кинжибулатовна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 127 с. : 4 ил.

Оглавление
Список использованных сокращений
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Система фактора некроза опухоли альфа и его рецепторов: структура, функции и регуляция
1.2. Молекулярные механизмы регуляции апоптоза, опосредованные фактором некроза опухоли альфа
1.3. Механизмы нарушения апоптоза, регулируемого фактором некроза опухоли альфа, и их роль в патогенезе различных заболеваний
Заключение
Глава 2. Материал и методы исследования
2.1. Материал исследования
2.1.1. Характеристика экспериментального блока
исследования
2.1.2. Характеристика клинического блока исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Выделение лимфоцитов крови
2.2.2. Культивирование лимфоцитов крови
2.2.3. Оценка реализации апоптоза лимфоцитов
крови методом проточной лазерной цитофлуориметрии
2.2.3.1. Исследование количества апоптотически измененных лимфоцитов крови в аннексиновом тесте
с использованием пропидия йодида
2.2.3.2. Регистрация изменения величины мембранного потенциала митохондрий лимфоцитов крови
2.2.4. Оценка уровня активных форм кислорода в лимфоцитах крови
2.2.5. Определение продукции фактора некроза опухоли альфа лимфоцитами крови
2.2.6. Оценка количества лимфоцитов крови, несущих на своей поверхности рецептор к фактору некроза опухоли альфа I типа
2.2.7. Приготовление клеточных лизатов для проведения вестерн-блоттинга
2.2.8. Определение содержания белков-регуляторов апоптоза в лимфоцитах крови методом вестерн-блоттинга

2.2.9. Статистический анализ результатов исследования
Глава 3. Результаты собственных исследований
3.1. Особенности реализации программированной гибели лимфоцитов крови при действии рекомбинантной формы фактора некроза опухоли альфа
3.1.1. Изменения количества апоптотических и некротизированных лимфоцитов крови в условиях культивирования с рекомбинантной формой фактора некроза опухоли альфа
3.1.2. Молекулярные механизмы участия фактора некроза опухоли'альфа в реализации апоптотической гибели лимфоцитов крови
3.1.2.1. Изменения количества клеток со сниженным трансмембранным потенциалом митохондрий и особенности продукции активных форм кислорода лимфоцитами в условиях культивирования с рекомбинантным фактором некроза опухоли альфа
3.1.2.2. Уровень транскрипционных факторов 14Р-кВ, Р53 и ингибитора циклинзависимых киназ Р21 ',¥А1'1/С1р| в лимфоцитах крови в условиях культивирования с рекомбинантным фактором некроза опухоли альфа
3.1.2.3. Уровень белков-регуляторов апоптоза семейства Вс1-2 в лимфоцитах крови в условиях культивирования с рекомбинантным фактором некроза опухоли альфа
3.2. Особенности реализации апоптотической гибели лимфоцитов крови в условиях различной продукции эндогенного фактора некроза опухоли альфа на клинической модели клещевого энцефалита
3.2.1. Состояние элементов системы ТЫРа - ТЫР-Ш у
пациентов с клещевым энцефалитом
3.2.2. Исследование числа апоптотически измененных лимфоцитов, изменение количества клеток со сниженным трансмембранным потенциалом митохондрий и уровня активных форм кислорода в лимфоцитах крови у пациентов с клещевым энцефалитом
3.2.3. Уровень белков-регуляторов' апоптоза в лимфоцитах кровиу пациентов с клещевым энцефалитом
3.2.3.1. Уровень транскрипционных факторов Ж-кВ и Р53 в лимфоцитах при клещевом энцефалите
3.2.3.2. Уровень белков-регуляторов апоптоза семейства Вс1-2 в лимфоцитах крови при клещевом энцефалите
Глава 4. Обсуждение результатов исследования
Выводы
Список литературы
Список использованных сокращений
АФК - активные формы кислорода
КЭ - клещевой энцефалит
ОКЭ - острый клещевой энцефалит
А\г - митохондриальный трансмембранный потенциал
AIF - апоптоз-индуцирующий фактор
FITC - флюоресцеинизотиоцианат
IkB - ингибитор NF-kB
IKK - ІкВ-киназа
IL- интерлейкин
JNK -киназа, фосфорилирующая фактор c-jun
MAP-киназа - митоген-активируемая протеинкиназа
NF-kB - ядерный фактор kappa В
NIK - NF-kB-индуцирующая киназа
РКС - протеинкиназа С
PLA2 - фосфолипаза А2
rTNFa - рекомбинантный фактор некроза опухоли альфа человека TNF-RI - рецептор к фактору некроза опухоли альфа 1-го типа TNF-RII — рецептор к фактору некроза опухоли альфа 2-го типа TNFa - фактор некроза опухоли альфа VDAC - потенциал-зависимый анионный канал

NSSA-npoxeiiH этого же возбудителя нарушает ассоциацию TRADD и FADD, что препятствует развитию апоптоза инфицированных клеток и опосредует формирование хронической персистенции вируса гепатита С [Miyasaka Y. et al., 2003].
В фибробластоподобных синовиоцитах, полученных у пациентов с ревматоидным артритом, обнаружен мультидоменный белок JAB1 (Jun-activating domain binding protein 1), ответственный за связывание с адаптерным белком TRAF-2. Данные события, по всей вероятности, обуславливают пролиферативный эффект TNFa на указанные клетки, проявляющийся в одном из главных патогенетических факторов ревматоидного артрита - гиперплазии синовиальной оболочки суставов [Wang J. et al., 2006].
Опухолевая трансформация также может сопровождаться модуляцией проведения проапоптогенного сигнала, опосредованной адаптерами рецептора TNF-RI. Рядом исследователей было показано изменение экспрессии TRAF-2 в клетках разнообразных опухолей человека [Devergne О. et al., 1996; Zapata J.M. et al., 2000; Murray P.G. et al., 2001]. Предполагается, что кинетика содержания в малигнизированных клетках TRAF-2 играет определенную роль в различной чувствительности малигнизированных клеток, в частности, меланомы, к TNFa-индуцированному апоптозу в зависимости от стадии опухолевой прогрессии: относительно высокая г?а начальных и практически отсутствующая - на поздних сроках [Ivanov V.N., Ronai Z., 1999; Ivanov V.N. et al., 2003].
Вирус Эпштейн-Барр, благодаря наличию белка LMP-1, существенно модулирует апоптотическую реакцию клеток на TNFa путем взаимодействия с TRAF-1, -2 и -3, обеспечивая, таким образом, низкоуровневую активацию NF-kB [Eliopoulos A.G. etal., 1999].
Отсутствие нарушения образования ассоциированных с рецепторами TNFa протеиновых комплексов не является гарантом беспрепятственного прохождения апоптозмодулирующих эффектов цитокина. Установлено, что