Формирование иммунного ответа макроорганизма на введение белковолипополисахаридного комплекса Francisella tularensis разных подвидов : экспериментальное исследование

• Автор: Войткова, Валентина Владимировна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Иркутск
• Количество страниц: 133 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1 Липополисахарид возбудителя туляремии

1.1 Сравнительная биохимическая характеристика липополисахарида подвидов А. ш1агеп$
1.2 Влияние хемотипа и трансформации липополисахарида С. ш1а-гет(з на патогенез туляремии

1.3 Влияние липополисахарида Г. Ш1агет1з на иммунокомпетентные

клетки
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Экспериментальные животные
2.2 Штаммы бактерий
2.3 Питательные среды
2.4 Получение белковолипополисахаридного комплекса туляремий-ного микроба
2.4.1 Получение белковолипополисахаридного комплекса твин-экстракцией
2.4.2 Получение белковолипополисахаридного комплекса воднофенольным методом
2.5 Физико-химические свойства белковолипополисахаридного комплекса туляремийного микроба разных подвидов
2.6 Получение макрофагов, полиморфноядерных лейкоцитов и лимфоцитов
2.6.1 Получение резидентных перитонеальных макрофагов
2.6.2 Получение полиморфноядерных лейкоцитов
2.6.3 Получение лимфоцитов
2.7 Определение фагоцитарной активности макрофагов
2.8 Определение метаболитов кислорода в фагоцитах
2.9 Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы
2.10 Определение активности миелопероксидазы
2.11 Определение содержания неферментных катионных белков
2.12 Определение активности ЫО-синтазы
2.13 Определение активности супероксиддисмутазы
2.14 Определение цитокинпродуцирующей активности
2.15 Определение фенотипа клеток крови
2.15.1 Титрование антител
2.15.2 Приготовление раствора реагентов
2.15.3 Окрашивание клеток крови
2.15.4 Определение относительного и абсолютного количества клеток крови
2.15.5 Определение содержания клеток, синтезирующих цитоки-ны

2.16 Выявление фосфатидилсерина на лимфоцитах крови
2.17 Статистические методы
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
ГЛАВА 3 ДЕЙСТВИЕ БЕЛКОВОЛИПОПОЛИСАХАРИДНОГО КОМПЛЕКСА ТУЛЯРЕМИЙНОГО МИКРОБА РАЗНЫХ ПОДВИДОВ НА НЕСПЕЦИФИЧЕСКУЮ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ОРГАНИЗМА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ЖИВОТНОГО
3.1 Влияние белковолипополисахаридного комплекса туляремийного микроба разных подвидов на фагоцитарную активность и завершенность фагоцитоза
3.2 Бактерицидные системы фагоцитов при взаимодействии с белковолипополисахаридным комплексом туляремийного микроба разных подвидов
3.2.1 Кислородзависимый метаболизм фагоцитов
3.2.2 Активность глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы
3.2.3 Синтез монооксида азота фагоцитами
3.2.4 Активность супероксиддисмутазы
3.2.5 Активность миелопероксидазы
3.2.6 Содержание неферментных катионных белков
3.2.7 Влияние белковолипополисахаридного комплекса туляремийного
микроба на продукцию ИЛ-
ГЛАВА 4 ВЛИЯНИЕ БЕЛКОВОЛИПОПОЛИСАХАРИДНОГО КОМПЛЕКСА FRANCISELLA TULARENS1S РАЗНЫХ ПОДВИДОВ НА СУБ-ПОПУЛЯЦИОННЫЙ СОСТАВ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ БЕЛЫХ МЫШЕЙ
4.1 Функциональная способность клеток крови при взаимодействии с белковолипополисахаридным комплексом F. tularensis в условиях in vitro..
4.2 Влияние белковолипополисахаридного комплекса F. tularensis разных подвидов на активацию апоптоза клеток крови
4.3 Изменение субпопуляционного состава лимфоцитов крови в условиях in vivo
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АФК - активные формы кислорода
АФА - активные формы азота
БЛПСК - белковолипополисахаридный комплекс
БЛПСКт - белковолипополисахаридный комплекс, полученный твин-экстракцией
БЛПСКф - белковолипополисахаридный комплекс, полученный водно фенольным методом
БСА - бычий сывороточный альбумин
Г6ФДГ - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа
ДМСО - диметилсульфоксид
ЗФР - забуференный 0,9 % раствор хлористого натрия pH 7,
ИД - иммунизирующая доза
ИЗФ - индекс завершенности фагоцитоза
ИЛ - интерлейкины (1,4, 10 и т.д.)
ИФА - иммуноферментный анализ
ИФН-у - интерферон гамма
кзм - кислородзависимый метаболизм
кДа - килодальтон
КОЕ - колониеобразующая единица
лви - лейко-В-клеточный индекс
ЛД50 (Е05о) - доза испытуемого агента, вызывающая гибель 50 % взятых в опыт животных
ЛИС - липополисахарид
лти - лейко-Т-клеточный индекс
мкМ - микромоль
мМ - миллимоль
м.м. - молекулярная масса
мпо - миелопероксидаза
МФ - макрофаг
НАДФ - никотинамидадениндинуклеотид фосфат
НАДФ-Н - никотинамидадениндинуклеотид фосфат восстановленный
НСТ-тест - тест с нитросиним тетразолием
НКБ - неферментные катионные белки
НЧС — нормальная человеческая сыворотка
ПАФ - процент активных фагоцитов
ИМ - перитонеальные макрофаги
п.н. - пар нуклеотидов
ПЦР - полимеразная цепная реакция
пял - полиморфноядерные лейкоциты
СМФ - система мононуклеарных фагоцитов
сод - супероксиддисмутаза
сс - Р-подкласс хемокинов
схс - а-подкласс хемокинов

вии с методическими рекомендациями «Организация работы и обеззараживание материала, содержащего возбудителя чумы при проведении исследований методом проточной цитофлуориметрии» [22] и с соблюдением санитарно-эпидемиологических правил С.П. 1.3. 1285-03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности» [4].
Влияние БЛПСК F. tularensis разных подвидов на субпопуляционный состав клеток крови экспериментальных животных в условиях in vitro проводили на 60 белых мышах, в опытах in vivo использовали 335 мышей.
Оценку действия БЛПСК на апоптоз клеток крови осуществляли на 144 беспородных белых мышах. Животных разделили на шесть опытных групп и вводили подкожно (в правую заднюю лапу) БЛПСК F. tularensis в дозе 10 мкг/0,2 мл ЗФР и ЛПС S. enteritidis в той же дозе. Контролем служили 10 интактных белых мышей. Для исследования забор крови из шейных сосудов экспериментальных животных осуществляли на 3, 6 и 9 сутки после инокуляции антигена.
2.2 Штаммы бактерий
При выполнении работы (получение БЛПСК, заражение и вакцинация экспериментальных животных, постановка реакций фагоцитоза и т.д.) использовали 5 штаммов туляремийного микроба. Все штаммы до включения в опыты хранились в лиофилизированном состоянии в музее живых культур ФКУЗ «Иркутский научно-исследовательский противочумный институт» Роспотребнадзора.
Штамм F. tularensis 15 НИИЭГ - вакцинный, ЛД50 для белых мышей -2 • 106, для морских свинок - 5 ■ 109.
Штамм F. tularensis subsp. tularensis Schu-11 (далее по тексту - Schu) получен в 1941 г. из язвы на пальце человека в Соединенных Штатах Америки, Del для белых мышей и морских свинок составляет 1 КОЕ.