Новые бактериальные патогены в пищевых продуктах: экспериментальное обоснование и разработка системы контроля с применением методов микробиологического и молекулярно-генетического анализа

• Автор: Ефимочкина, Наталья Рамазановна
• Шифр специальности: 14.02.01
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 349 с. : ил.

Оглавление

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. ЗНАЧЕНИЕ НОВЫХ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ЗАБОЛЕВАНИЙ С

ПИЩЕВЫМ ПУТЕМ ПЕРЕДАЧИ

1.1. Виды эмерджентных бактериальных патогенов

1.2. Общая характеристика пищевых эмерджентных инфекций

Глава 2. ИЗМЕНЧИВОСТЬ БАКТЕРИЙ КАК ОСНОВА ЭВОЛЮЦИ-

ОННЫХ ПРОЦЕССОВ ВОЗНИКНОВЕНИЯ НОВЫХ ВИДОВ ПАТОГЕНОВ

2.1. Генетические аспекты формирования патогенного потенциала неко- 21 торых видов возбудителей пищевых заболеваний
2.2. Основные факторы патогенности
2.3. Рейтинг приоритетных факторов, обуславливающих появление бак- 39 териальных патогенов с измененными свойствами
Глава 3. ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ ПРОИЗВОДСТВА И НЕКОТОРЫХ
СВОЙСТВ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ НА ФОРМИРОВАНИЕ ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ НИШИ ПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ
3.1. Роль физико-химических и биологических воздействий в формиро- 46 вании некоторых типов толерантности бактерий, контаминирующих пищевые продукты
3.2. Регуляторные механизмы ответных реакций микроорганизмов на 48 неблагоприятные воздействия факторов окружающей среды.
3.3. Прикрепление микроорганизмов к поверхностям и стрессовая толе- 54 рантность
3.4. Влияние индуцированной стрессовой толерантности на проявление 55 вирулентных свойств пищевых патогенов
3.5. Некультивируемые формы бактерий в пищевых продуктах
Глава 4. РОЛЬ НОВЫХ ПАТОГЕНОВ В ИНФЕКЦИОННОЙ ПАТО-
ЛОГИН ЧЕЛОВЕКА И ЭПИДЕМИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ
4.1. Структура заболеваемости и эпидемиологические аспекты проблемы
4.2. Анализ эпидемиологической ситуации, экологии и путей передачи 67 некоторых эмерджентных возбудителей
4.3. Листерии как болезнетворные микроорганизмы и их роль в возник- 78 новении эпидемических инфекций
4.4. Новый вид пищевых бактериальных патогенов Enterobacter saka-

Глава 5. СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ПИЩЕВЫХ ПАТОГЕНОВ
5.1. Выявление диагностически значимых фенотипических признаков эмерджентных патогенов: роль бактериологических и биохимических методов исследования
5.2. Иммунологические методы исследования некоторых эмерджентных патогенов
5.3. Молекулярно-генетическая диагностика эмерджентных пищевых патогенов
5.3.1. Методы ДНК гибридизации
5.3.2. Применение полимеразной цепной реакции для выявления, идентификации и определения количественных уровней эмерджентных патогенов
5.3.3. Использование ДНК-типирования для внутривидовой дифференциации эпидемиологически значимых клональных линий патогенных микроорганизмов
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 6. ОРГАНИЗАЦИЯ ПРОВЕДЕНИЯ РАБОТ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Глава 7. АНАЛИЗ РАСПРОСТРАНЕННОСТИ НЕКОТОРЫХ ПАТОГЕННЫХ МИКРО ОРГАНИЗМОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ И ОБЪЕКТАХ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
7.1 БГКП и энтерогеморрагические E.coli
7.2 Listeria monocytogenes 13 Campylobacter spp.
7.4 Salmonella spp.
7.5 Количественная оценка уровней контаминации сырья и пищевых продуктов эмерджентными патогенами.
Глава 8. ОЦЕНКА РОЛИ L. MONOCYTOGENES КАК ОДНОГО ИЗ НАИБОЛЕЕ ЗНАЧИМЫХ НОВЫХ ПАТОГЕНОВ
8.1. Межвидовая дифференциация и изучение фенотипических свойств выделенных штаммов листерий
8.2. Современный комплексный подход к идентификации листерий при микробиологическом контроле на предприятиях пищевой индустрии
8.2.1. Применение метода иммуномагнитной сепарации
8.2.2. Изучение возможности применения метода ДНК-гибридизации для выявления L.monocytogenes
8.2.3. Применение метода ПЦР для изучения L. monocytogenes
8.3. Экспериментальное изучение некоторых закономерностей выживания и размножения листерий в модельных системах
8.3.1. Влияние тепловой обработки наL.monocytogenes
8.3.2. Изучение выживаемости L.monocytogenes в молоке в процессе длительного хранения
8.3.3. Чувствительность листерий к неблагоприятным воздействиям внешней среды
8.3.4. Исследование взаимодействия L.monocytogenes и других эмерд-жентных патогенов с антагонистически активной микрофлорой пищевых продуктов
8.4. Применение общих принципов обеспечения микробиологической безопасности для эффективного контроля L.monocytogenes в пищевых продуктах
Глава 9. ENTEROBACTER SAKAZAK1I - НОВЫЙ ВИД ЭМЕРДЖЕНТ-НЫХ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ В ОБЩЕЙ СИСТЕМЕ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ ПРОДУКТОВ ДЕТСКОГО ПИТАНИЯ
9.1. Выделение и биохимическая идентификация штаммов E. sakazakii
9.2. Нормирование и методическая схема обнаружения патогенных микроорганизмов E. sakazakii в продуктах для питания детей раннего возраста
9.3. Таксономия E. sakazakii и совершенствование методов типирования возбудителя
Глава 10. ЗНАЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ ПОТЕНЦИАЛЬНО ПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ В ВОЗНИКНОВЕНИИ ЭМЕРДЖЕНТ-НЫХ ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОЗОВ
10.1. S.aureus и стафилококковые энтеротоксипы
10.2. Обнаружение энтеротоксигенных стафилококков в пищевых продуктах
10.3. Изучение условий, влияющих на жизнедеятельность стафилококков и биосинтез эитеротоксинов в некоторых видах пищевых продуктов
10.4. Разработка методов определения стафилококковых энтеротоксинов в пищевых продуктах с применением иммуноферментного анализа.
10.5. Изучение взаимодействия S.aureus с другими эмерджентными микроорганизмами; роль mixt-возбудителей в возникновении вспышек пищевых заболеваний
10.6. Изучение токсигенных свойств новых видов мицелиальных грибов - возбудителей пищевых микотоксикозов

свойств веротоксигенных штаммов E.coli серотипов 026:Н11, 0157:Н7 и др., подтвердивших высокую степень гомологии и сходства их с шигатоксином (Stx), продуцируемым Shigella dysenteriae типа 1 [Paton J.C. et al., 1998]. В табл. 2.4 приведена номенклатура шигатоксинов, предложенная Calderwood S.B. et al., 1996.
Таблица 2.
Номенклатура шигатоксинов
Предыдущая номенклатура Новая номенклатура
Ген Протеин
Shiga toxin (Stx) stx Stx
Shiga-like toxin I (SLT-I) или vero-toxin 1 (VT 1) Stxl Stxl
Shiga-like toxin II (SLT-II) или ve-rotoxin 2 (VT 2) Stx2 Stx
SLT-Пс или VT 2c Stx2c Stx2c
SLT-IIe или VT 2e Stx2e Stx2e
В последние годы появилась возможность проведения тонких молекулярных сравнений между структурами отдельных токсинов. Было показано, что токсины микроорганизмов из отдаленных семейств и даже родов, занимающих различные экологические ниши, и вызывающие совершенно не похожие инфекционные болезни, оказались весьма сходными по механизму действия и по критическим для проявления токсичности структурам (например, шигатоксин и холерный токсин). Было также обнаружено сходство между токсинами и ферментами эукариотических клеток, свидетельствующее о широком эволюционном родстве их между собой. Считают, что бактериальные токсины, интерфероны, бактериоцины и гормоны имеют сходство в отношении целого ряда важных свойств. Эти вещества синтезируются одним типом клеток, воздействуя на другие типы клеток в чрезвычайно низких концентрациях; они обладают сходной молекулярной организацией и состоят как минимум из двух функционально и структурно различных белков: энзиматического и рецепторного; имеют сходные звенья молекулярного механизма действия (связывание с рецепторами, активация, транслокация внутрь клетки и модификация клеточных мишеней); обладают сходной кинетикой биологического эффекта и высокой токсичностью.
Факторы патогенности микроорганизмов следует рассматривать не только как функцию адаптации к организму хозяина, но и как ответную реакцию метаболизма бактерий на сигналы, исходящие от окружающей среды при смене экологической ниши. Это особенно важно при рассмотрении механизмов и факторов патогенности эмерджентных возбудителей, на которых оказывают влияние многообразные парамет-