Модулирующее влияние аминокислот и пептидов на развитие хрящевой ткани в органотипической молодых и старых крыс

• Автор: Смирнов, Андрей Валерьевич
• Шифр специальности: 14.01.30
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 86 с. : 20 ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ВОЗРАСТНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ХРЯЩЕВОЙ ТКАНИ

(обзор литературы) ■

1.1. Структурно-функциональные особенности хрящевой ткани

1.2. Дегенеративные возрастные изменения хрящевой ткани

1.3. Изменения биохимического состава хряща при остеоартрозе

1.4. Современные методы стимуляции регенерации хрящевой ткани

1.5. Регуляторная роль аминокислот

1.6. Роль биорегуляторных пептидов в функционировании тканей
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Состав питательной среды
2.2. Получение коллагена и коллагеновой подложки
2.3. Выделение тканей
2.4. Морфологические и морфометрические методы исследования развития эксплантатов в органотипической культуре тканей
2.5. Препараты, исследованные в культуре тканей
2.5.1. Аминокислоты
2.5.2. Трипептиды
2.5.3. Комплексные пептиды
2.5.3.1. Хондролюкс®
2.5.3.2. Контрольные комплексные пептиды
2.6. Определение эффективной концентрации аминокислот и пептидов
в органотипической культуре тканей
2.7. Иммуноцитохимические методы исследования эксплантатов
2.7.1. Морфометрические исследования и компьютерный анализ
микроскопических изображений
2.8. Статистическая обработка экспериментальных данных

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 3. ВЛИЯНИЕ АМИНОКИСЛОТ НА ОРГАНОТИПИЧЕСКУЮ КУЛЬТУРУ ХРЯЩЕВОЙ ТКАНИ МОЛОДЫХ И 46 СТАРЫХ КРЫС
3.1. Влияние аминокислот на рост эксплантатов хряща молодых и старых крыс
3.2. Влияние сочетаний аминокислот на органотипическую культуру хрящевой ткани
3.3. Исследование процессов пролиферации и апоптоза при действии
аминокислот в эксплантатах хряща молодых и старых крыс
Глава 4. ВЛИЯНИЕ ТРИПЕПТИДОВ НА ОРГАНОТИПИЧЕСКУЮ КУЛЬТУРУ ХРЯЩЕВОЙ ТКАНИ МОЛОДЫХ И 56 СТАРЫХ КРЫС
4.1. Исследование влияния трипептидов на развитие эксплантатов хряща молодых и старых крыс
4.2. Сравнительное изучение трипептидов в органотипических
культурах разных тканей
Глава 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ХОНДРОЛЮКСА В ОРГАНОТИПИЧЕСКОЙ КУЛЬТУРЕ ТКАНИ ХРЯЩА МОЛОДЫХ И СТАРЫХ КРЫС
5.1. Влияние Хондролюкса на рост эксплантатов хрящевой ткани молодых и старых крыс
5.2. Тканеспецифические свойства Хондролюкса
Глава 6. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография
Г АГ - глюкозоаминоглюканы
ИП - индекс площади
ММР - матриксметаллопротеиназа
ОА - остеоартроз
расщепляли на отдельные волокна при помощи тонких пинцетов. Затем волокна опускали в колбу, наполненную 150 мл 0,1% раствора ледяной уксусной кислоты, и оставляли при температуре 2-4 °С на 48 часов. Затем содержимое колбы центрифугировали в течение 1 часа при 6000 об/мин и получали до 80 мл вязкого раствора. К остатку добавляли 30 мл раствора уксусной кислоты, через 24 часа снова центрифугировали и в результате получали до 40 мл раствора коллагена. Приготовленный таким способом коллаген может храниться в холодильнике в течение одного года. Перед использованием коллаген подвергали диализу и испытывали на стерильность. Диализированный стерильный коллаген наносили на обезжиренную пластиковую поверхность чашки Петри (6=40 мм). Через час коллаген сливали, и поверхность высыхала на воздухе при комнатной температуре. Коллаген на дне чашки Петри образует тонкую пленку. Перед использованием поверхность необходимо несколько раз промыть раствором Хенкса.
2.3. Выделение тканей
Всего в работе использовали органотипические культуры хрящевой ткани (всего 1500 эксплантатов) и по 400 эксплантатов тканей тимуса, головного мозга, шишковидной железы (эпифиза), сердца, поджелудочной железы, щитовидной железы, семенников, предстательной железы, почек, мочевого пузыря, сосудов, яичников, печени, сетчатки глаза молодых (3-месячных) и старых (24-месячных) крыс линии Вистар.
В качестве хрящевой ткани использовали мечевидный отросток грудины молодых (3-месячных) и старых (24-месячных) крыс линии Вистар.
Для взятия материала и его препарирования использовали набор инструментов для микрохирургии глаза. Ткани извлекали в стерильных условиях, разделяли на фрагменты величиной около 1 мм3 и затем 20-25 таких фрагментов помещали на дно чашки Петри, предварительно покрытое коллагеновой пленкой, на расстоянии 3 мм друг от друга. Чтобы эксплантаты