Морфологические особенности интрамедуллярных стромальных структур гемопоэтической ниши и элементов лимфоидной стромы при хроническом лимфолейкозе

• Автор: Семенова, Наталья Юрьевна
• Шифр специальности: 14.01.21
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 114 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Хронический лимфолейкоз (ХЛЛ)
1.2. Биология ниши гемопоэтических стволовых клеток костного мозга: строение и функции
1.3. Роль стромального микроокружения костного мозга в нормальном и малигнизированном гемолимфопоэзе, включая ХЛЛ
1.4. Участие стромы лимфоидной ткани в развитии лимфоидных предшественников в норме и ее состояние при малигнизации лимфопоэза
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Общая характеристика пациентов
2.2. Методы исследований
2.3. Методы статистической обработки
2.4. Объем проведенных исследований
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Нишеобразующие структуры стромального микроокружения костного мозга в норме
3.2. Паренхима и формирующие нишу стволовых клеток стромальные образования костного мозга при ХЛЛ
3.3. Гистоморфологическая характеристика стромального компонента в лимфатических узлах при немалигнизированных реактивных лимфаденопатиях
3.4. Особенности структурной организации стромы лимфатических узлов при ХЛЛ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ 99 '
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Механизмы, определяющие злокачественную трансформацию клеток-предшественниц лимфопоэза при лимфопролиферативных заболеваниях окончательно не расшифрованы, в связи с чем исследования с целью получения неизвестных ранее, новых данных, связанных с лейкозной трансформацией клеток и, в частности, основанных на анализе мало изученной на сегодня кроветворной и лимфоидной стромы, особенно нишеобразующих структур являются одной из актуальных проблем современной гематологии. В обширной группе лимфопролиферативных заболеваний хронический лимфолейкоз (ХЛЛ) стоит на первом месте по частоте встречаемости [1]. В установлении причин появления и дальнейшей судьбы лейкозного клона при этом заболевании значимое место занимает изучение особенностей состояния ключевых нишёобразующих стромальных структур кроветворного и лимфоидного микроокружения, непосредственно регулирующих развитие гемопоэтических стволовых клеток и их коммитированных в лимфоидном направлении потомков [47, 55, 109, 137].
Состоянию костномозговой стромы, оценке ее роли в нормальном гемолимфопоэзе и значению ее дефектов в развитии гемобластозов, включая лимфопролиферативные заболевания, в последние годы уделяется большое внимание [9, 12, 36, 38, 59, 65]. При этом особенности структурной организации элементов стромального микроокружения, участвующие в формировании ниши клеток-предшественниц гемолимфопоэза в целом и при ХЛЛ в частности, практически не изучены. Согласно концепции остеобластно-васкулярной ниши кроветворное микроокружение содержит специализированные стромальные клеточные структуры - ниши, формируемые элементами стромы эндоста и микрососудами, которые определяют локализацию стволовых клеток и создают условия для их длительного самоподдержания, а также регулируют их дифференцировочный и пролиферативный потенциал. Вне ниши стволовые кроветворные клетки не способны выполнять свои функции [90, 134, 171, 174]. Также известно, что именно в костномозговых нишах гемопоэтические стволовые клетки (ГСК) получают первоначальные сигналы гемопоэзиндуцирующего микроокружения, направляющие развитие гемопоэтических предшественников в лимфоидном направлении. Коммитированные лимфоидные предшественники мигрируют из костного мозга в лимфоидные органы, где при непосредственном влиянии стромального компонента лимфоидной ткани происходит их дальнейшее развитие.
В связи с этим анализ структурных особенностей кроветворной ткани и состояния стромального микроокружения больных ХЛЛ является актуальным, так как на основании сведений о морфофункциональном статусе паренхимы и стромы костного мозга представляется
возможным получить факты, уточняющие патогенез появления и становления неопластического клона В-лимфоцитов при ХЛЛ.
В тоже время, практически отсутствуют работы о состоянии не менее значимого регуляторного компонента, определяющего лимфопоэз - лимфоидного микроокружения, при нарушениях пролиферации и дифференцировки лимфоидных клеток при их малигнизации [5, 31, 45]. Коммутированные в лимфоидном направлении стволовые клетки мигрируют из стромальной ниши костного мозга в различные лимфоидные ткани и органы, в частности, лимфатические узлы. В них под воздействием, прежде всего фолликулярных дендритных клеток (ФДК) и эндотелия микрососудов, происходят завершающие этапы В-лимфопоэза и иммуногенеза. Учитывая этот факт, важную роль приобретает анализ состояния стромальных структур лимфатических узлов, напрямую ответственных за процессы пролиферации и дифференцировки мигрировавших из костного мозга лимфоидных предшественников.
Таким образом, изучение морфофункциональных свойств ключевых нишеобразующих элементов кроветворного и лимфоидного микроокружения при малигнизированном лимфопоэзе является значимой научно-практической задачей. Сведения, полученные в ходе ее решения, важны для теоретической и практической гематологии, так как будут способствовать расшифровке патогенеза ХЛЛ,,уточнению прогноза его течения и совершенствованию качества лечения заболевания.
Степень разработанности темы
Структурная организация стромы костного мозга при гемобластозах в целом изучена, однако морфофункциональный статус нишеобразующих элементов стромального микроокружения костного мозга, эндостальных образований и сосудов микроциркуляции при малигнизации лимфопоэза, в частности у больных ХЛЛ, охарактеризован мало. Недостаточно изучено состояние лимфоидного микроокружения при злокачественной трансформации лимфоидных предшественников и практически отсутствуют сведения о фолликулярных дендритных клетках, экстрацеллюлярном матриксе и характере микроциркуляции лимфатических узлов при ХЛЛ.
До настоящего времени в условиях появления лейкозного клона у больных ХЛЛ отсутствует одновременный, сочетанный анализ ключевых стромальных структур костного мозга и лимфатических узлов, непосредственно участвующих в регуляции гемолимфопоэза и не сформулировано представление роли дефектов нишеобразующих образований кроветворной и лимфоидной стромы в патогенезе ХЛЛ.

ДК играют в норме важную роль в формировании микроокружения кроветворных клеток костного мозга и лимфоидной ткани. Иммунофенотип незрелых мДК: CD1+, низкая экспрессия CD83, CD208(DC-LAMP)-, CD209(DS-SIGN)+, цитоплазматический МНС II. Иммунофенотип зрелых мДК: CD1+-, высокая экспрессия CD83, CD208(DC-LAMP)+, CD209(DS-SIGN)-, мембранная экспрессия МНС II [2].
ДК считаются наиболее важным фактором, определяющим состав лимфоидной популяции и влияющим на регулирование функциональной активности лимфоидных клеток. Они могут создавать не только противоопухолевые, но и проопухолевые стимулы. Так, ДК совместно с TGFP способствуют дифференцировке предшественников РохРЗ-клеток в зрелые CD4+ РохРЗ-клетки. С другой стороны, ДК не только презентируют опухолевые антигены натуральным киллерам и цитотоксическим клеткам, которые обеспечивают противоопухолевый иммунитет, но и принимают непосредственное участие в элиминации опухолевых клеток [8].
Стоит отметить, что XJIJI характеризуется большим количеством CD5+ долгоживущих клеток в костном мозге, крови и вторичных лимфоидных органах [1, 125, 126]. На сегодняшний день, принято считать, что устойчивость к апоптозу и избирательное выживание опухолевых клеток не только автономная характеристика, но зависит от внешних антиапоптозных стимулов. Это подтверждается тем фактом, что, несмотря на их долгую жизнь in vivo, XJIJI клетки часто уходят в апоптоз в условиях in vitro. Это также позволяет предположить, что в условиях in vitro клетки не получают сигналов выживания, которые присутствуют в микроокружении in vivo. Некоторые сигналы, исходящие от стромальных и Т клеток костного мозга, как оказалось, усиливают рост и продлевают жизнь XJIJÏ клеток [31, 45, 47].
Не так давно было отмечено, что внеклеточный тиоредоксин защищает XJIJ1 клетки от апоптоза in vitro [33, 126]. Тиоредоксин является мультифункциональным белком, который повсеместно экспрессируется в небольшом количестве во всех клетках тела. Внутриклеточный тиоредоксин имеет как антиапоптотический эффект так и ростовой эффект. Некоторые клетки способны высвобождать тиоредоксин. Эта внеклеточная форма тиоредоксина имеет цитокиновую и хемокиновую активности [33, 71, 130].
Было показано, что Т-клетки в микроокружении XJIJI подавляют апоптоз опухолевых клеток. Также было показано, что хотя Т-клетки продуцировали интерферон гамма и ИЛ-4, экспрессия тиоредоксина в этих клетках не была повышена. Стромальные клетки лимфоидной ткани также присутствовали в центрах пролиферации ХЛЛ. Интересно, что экспрессия тиоредоксина коррелировала с присутствием как стромальных клеток, так и с пролиферирующими Ki-67-клетками опухоли, причем размер и число пролиферативных центров варьировало от пациента к пациенту. У пациентов с большим соотношением пролиферирующих клеток Ki-67+, тиоредоксинэкспрессирующие клетки были главным