Оптимизация заживления костной раны челюсти путем использования аутологичных и аллогенных стволовых клеток, выделенных из жировой ткани (экспериментальное исследование)

• Автор: Черняев, Сергей Евгеньевич
• Шифр специальности: 14.01.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 104 с. : 14 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Название раздела
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ
ОБОЗНАЧЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Физиологические и патофизиологические предпосылки существования стволовых клеток в жировой ткани
1.2. Принципы выделения СКЖТ
1.3. Пролиферация и культивирование СКЖТ
1.4. Фенотипическая характеристика СКЖТ
1.5. Дифференцировочные потенции СКЖТ in vitro
1.6. Злокачественная трансформация СКЖТ при длительном
культивировании
1.7. Вероятные механизмы регенеративного действия MCK in
vivo и при трансплантации
1.8. Иммунологические свойства СКЖТ
1.9. Механизмы регенерации костной ткани
1.10 Подходы к регенерации костных дефектов с помощью ме-
зенхимальных стволовых клеток Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Выделение и культевирование клеток
2.1.1. Индукция адипогенной дифференцировки
2.1.2. Индукция остеогенной дифференцировки
2.1.3. Индукция хондрогенной дифференцировки
2.2. Исследование на животных
2.3. Сравнение аутологичных и аллогенных СЮКТ на регенера-
цию костной ткани в модели дефекта угла нижней челюсти кролика
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Исследование дифференцировочных потенций СКЖТ in vitro
3.2. Сравнение влияния СКЖТ аутологичного и аллогенного
происхождения на регенерацию полнокостного дефекта нижней челюсти кролика
Глава 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
СКЖТ - стволовые клетки жировой ткани
мск - мезенхимальные стволовые клетки
ССФ - стромально-сосудистая фракция
сккм - стволовые клетки костного мозга
GDF-5 - growth difference factor, ростовой дифференцировочный фак-

BMP - born morfogene protein, костный морфогенный белок
VEGF - vascular endothelium growth factor, фактор роста сосудистого
эндотелия
РТПХ - реакция трансплантат против хозяина
НБК - неколлагеновые белки костной ткани
ФР - фактор роста
ОНБ - основные и нейтральные белки
КБ — кислые белки
ИДС — иммунодефицитное состояние
ГА - гидроксиапатит
ТКФ - трикальцийфосфат
PGLA - polyglycoleum acid, полигликолевая кислота
PEGDA - polietilenglikoldiakrilatum, полиэтиленгликольдиакрилатный
СЭМ - сканирующая электронная микроскопия
М. - Москва
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
В хирургий и хирургической стоматологии возникает необходимость поиска путей усиления построения полноценной в анатомическом и функциональном отношении костной ткани, что важно для пациентов со значительными по размеру дефектами, имеющими нарушение обмена веществ, сахарный диабет и другие общесоматические заболевания. У таких пациентов необходимо применение новых технологий, позволяющих усилить
репаративный процесс костной ткани (|А.И. Воложин|, 2000; Amit М., 2000; Fleming J.E., 2000). К новым технологиям относится применение стволовых клеток, дифференцированных в остеогенном направлении. До настоящего времени основным источником получения стволовых клеток был костный мозг человека. Методы выделения, дифференцировки мезенхимальных клеток костного мозга, заселение ими поверхности носителей (металлы, пластмассы и др.) для внесения в костную рану, успешно разрабатываются (Ю.И. Денисов-Никольский и соавт., 2003; Т.Ю. Татаренко-
Козьмина и соавт., 2005, |А.И. Воложин) и соавт., 2002 - 2006 и другие).
В последние годы, наряду с косным мозгом, как источник стволовых клеток, широкое распространение получила жировая ткань. Однако, перспектива применения аутологичных и аллогенных стволовых клеток, полученных из жировой ткани, остается малоизученным вопросом. Имеются разные мнения, не подкрепленные научными данными. Полностью отсутствуют сравнительные данные остеорегенераторной эффективности применения аутологичных и аллогенных стволовых клеток, выделенных из жировой ткани. Преимущества этих клеток заключаются в том, что они могут быть выделены в большом количестве, с минимальными болезненными ощущениями для пациента.
Вышеперечисленное свидетельствует о том, что жировая ткань и расположенные в ней популяции стволовых клеток могут быть альтернативой
межклеточное взаимодействие Т-клеток и СКЖТ/ СККМ не является определяющим в реализации иммуносупрессорных свойств стволовых клеток, однако усиливает этот эффект (Cui L, 2007, Yanez R, 2006; Puissant В, 2005).
Таким образом, СКЖТ подобно СККМ обладают иммунносупресив-ными свойствами. Однако, данные, полученные в системе in vitro, не означают, что в условиях in vivo трансплантированные СКЖТ не будут вызывать реакцию Т-клеток.
На модели гаплоидентичной гемопоэтической трансплантации у мышей было исследовано влияние СКЖТ на развитие потенциально летальной реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ). При трехкратном введении СКЖТ в течение первых 7 дней после гемопоэтической трансплантации выживаемость животных составила 75%, тогда как в контрольной группе все животные погибали в течение 55 дней. Эти данные дают основание предполагать, что СКЖТ могут эффективно контролировать РТПХ, связанную с трансплантацией аллогенных гемопоэтических предшественников (Yanez R, 2006).
Известно, что некоторые цитокины и растворимые молекулы, такие как HGF, TGFp, IL-10, могут быть вовлечены в иммуносупрессивный статус МСК (Meisei R, 2004; Di Nicola М, 2002; Beyth S, 2005). Трансплантированные аллогенные MCK не подвергались иммунному узнаванию, при этом отмечали повышенный уровень PGE2 (Aggarwai S, 2005). Ингибирование TGFp и HGF не влияет на иммуносупрессивные свойства СКЖТ, а ингибирование PGE2 приводило к отмене супрессивных свойств СКЖТ человека (Cui, L, 2007).
В связи с иммуносупрессивными способностями СККМ и СКЖТ в последнее время появляются сообщения о клиническом применении этих популяций клеток для терапии острой РТПХ. Так, например, показано быстрое улучшение состояния пациента после введения СККМ в IV стадии