Применение аутологичных стромальных клеток из жировой ткани для восстановления объёма кости альвеолярных отростков/частей верхней и нижней челюстей

• Автор: Чаусская, Ирина Юрьевна
• Шифр специальности: 14.01.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 98 с. : 48 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Список сокращений Введение
Глава 1.

Глава 2.

аутологичных
альвеолярного части нижней
Обзор литературы
Современный взгляд на механизм регенерации костной ткани
Использование трансплантатов при восстановлении костных дефектов альвеолярных отростков верхней и нижней челюстей
Тканевая инженерия с использованием стромальных клеток из жировой Материал и методы исследования
Методы восстановления объема кости отростка верхней челюсти и альвеолярной челюсти
Материалы, используемые в качестве носителей аутологичных стромальных клеток из жировой ткани Метод выделение и культивирование СКЖТ Получения первичной культуры СКЖТ человека Подготовки аутологичной сыворотки крови пациента Сравнительная оценка пролиферации клеток СКЖТ при культивировании с использованием сред АсКапсеЗТЕМ и ОМЕМ, фетальной бычьей сыворотки и аутологичной сыворотки крови пациента Метод цитофлуориметрического исследовани Оценка уровня апоптоза методом цитофлуориметрии.
Характеристика экспрессии поверхностных маркеров СКЖТ методом цитофлуориметри Метод оценки мультипотентности и пролиферативного потенциала выделяемой и культивируемой популяции аутологичных СКЖТ
Доказательство мультипотентных свойств выделяемой и
культивируемой популяции аутологичных СКЖТ
Оценка способности СКЖТ, дифференцированных в
остеогенном направлении культивированных с
использованием сред разного состава, к остеогенной
дифференцировке, и их пролиферативной активности.
Подготовка тканеинженерных конструкций к трансплантации
Метод гистологического анализа биопсий
Метод иммуногистохимического анализа биопсий
Метод морфометрии костной ткани
Метод дентальной объемной томографии (ДОТ)
проточной

клеточных

Глава 3.

3.6 Глава 4.

Результаты и обсуждение лабораторных исследований. 55 Фенотипические и функциональные характеристики СКЖТ. Создание тканеинженерных конструкций.
Сравнение пролиферативной активности СКЖТ при 57 культивировании в средах АсКапсеЗТЕМ или БМЕМ в присутствии аутологичной сыворотки или 10% фетальной бычьей сыворотки.
Оценка уровня апоптоза и распределения клеток СКЖТ по 58 фазам клеточного цикла.
Характеристика экспрессии поверхностных клеточных 59 маркеров СКЖТ методом проточной цитофлуориметрии.
Оценка мультипотентных свойств СКЖТ при 63 культивировании с использованием АбуапсеБТЕМ с аутологичной сывороткой.
Оценка пролиферативной активности стромальных клеток 66 жировой ткани в условиях индукции остеогенной дифференцировки при культивировании в среде АбуапсеЗТЕМ с аутологичной сывороткой Анализ способности СКЖТ адгезировать на «КоллапАн-Г»
и Г АП. Создание тканеинженерных конструкций Результаты пилотного клинического исследования.
Обзор клинического материала по результатам лечения
пациентов с дефектами и атрофией альвеолярных отростков/частей верхней и нижней челюстей с использованием тканеинженерных конструкций на основании СКЖТ и остеогенных носителей.
Результаты клинического исследования введения 77 тканеинженерных конструкций при лечении пациентов с дефектами и атрофией альвеолярных отростков верхних челюстей.
Результаты клинического исследования введения 100 тканеинженерных конструкций при лечении пациентов с дефектами и атрофией альвеолярных частей нижних челюстей.
Гистологический анализ биопсий.
Заключение
Выводы
Практические рекомендации Список литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СКЖТ -стромальные клетки жировой ткани
ГАП - кальцийфосфатный ГИДРОКСИАПОЛ
«КоллапАн-Г» -гидроксиапатит с коллагеном и гентомицином
ФБС - фетальная бычья сыворотка
АС - аутологичная сыворотка
ЭТС -эмбриональная телячья сыворотка
DMEM - Dulbecco's Modified Eagle's Medium -
универсальная среда для культивирования клеток
БСА - бычий сывороточный альбумин
PBS -фосфатно-солевой буфер
МСК - мезенхимальные стволовые клетки
МККМ - мезенхимальные клетки костного мозга

дифференцироваться в различных направлениях при индукции в соответствующих средах и т.д.
Плотность посадки клеток на носитель также влияет на образование костной ткани. Так в имплантатах с высокой плотностью посадки клеток отмечали большее образование костной ткани, её плотность была выше, чем в имплантатах с низкой плотностью посадки. ( С.Е.Wilson, W.J.Dhert, C.A. Van Blitterswijk, 2002; H. Yuan, M.Van Den Doel, S.Li, 2002)
Современный уровень развития клеточных технологий позволяет создавать эквиваленты костной ткани - тканеинженерные конструкции, состоящие из носителя и предшественников клеток костной ткани. Интерес к использованию подобных инновационных технологий связан, в первую очередь, с недостатками широко применяющихся лечебных подходов к восполнению костного дефицита, основанных на принципах замещения костных дефектов различными материалами, не обладающих в должной степени остеоиндуктивными свойствами и ограниченным количеством собственных тканей, пригодных для аутотрансплантации.
Главным преимуществом данного инновационного подхода является:
1. возможность получения не ограниченного количества костной ткани для восстановления объема кости;
2. принцип аутологичности, а значит биобезопасности и образования очагов остеогенеза непосредственно после трансплантации;
3. генетически запрограммированные регуляторные механизмы, исключающие избыточное образование костной ткани в отличие от препаратов содержащих рекомбинантные морфогенетические белки.
Таким образом, в настоящее время область тканевой инженерии является активно развивающейся. Проведенное в настоящей работе исследование является актуальным и выполненным на высокотехнологичном уровне: в основе разработанной технологии лежит использование тканеинженерных конструкций на основе культивированных и