Стимуляция ангио/миогенеза при сердечно-сосудистой патологии с использованием генной терапии и аутотрансплантации клеток-предшественников

• Автор: Еремеева, Марина Викторовна
• Шифр специальности: 14.01.24, 14.01.05
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 185 с. : ил.

Агщ-1,Апд-2 - ангиопоетины;

ЬБОБ- фактор роста фибробластов;

ЕСтП-1 - фактор ранней ростовой реакции;

еЕТОБ и 11408 - эндотелиальная и индуцибельная сннтетаза окиси азота;

О-СЗБ, ОМ-СББ - гранулорцитарные колониестимулирующие факторы роста; РЮР - фактор роста гепатоцитов;

Н1Р-1а - индуцируемый гипоксией фактор транскрипции;

РР/Б - интервенционное интрамиокардиальное введение (трансэндокардиально); РЮР- плацентарный фактор роста;

УБОР- фактор роста сосудистого эндотелия;

ААВ - аденоассоциированный вирус;

ГКП - клетки-предшественники гематопоэза;

ГСК - гематопоэтические клетоки;

ДББХ - длительность безболевой ходьбы;
ДКМП - дияятационнпя кардиомиопагия;
ИБС - ишемическая болезнь сердца;
ИНЛС - индекс нарушения локальной сократимости левого желудочка; иРНК - ингибирующая рибонуклеиновая кислота;
КМК - костномозговые клетки;
КМЦ - кардиомиоцит.
КП - клетки- предшественники (аутологичные);
МСК - мезенхимальные стволовые клетки;
ОФЭТ - однофотонная эмиссионная томография;
ПИКВ(В1М1) - прямое интрамиокардиальное введение;
ПЭТ - позитронно-эмиссиониая томография;
РФП - радиофармпрепарат;
ТЛБАП - транслюминальная баллонная ангиопластика;
УЗДГ - ультразвуковая допплерография сосудов;
ХИНК- хроническая ишемия нижних конечностей;
ЦЭК - циркулирующие эндотелиальные клетки;
ЦЭП - циркулирующие эндотелиальные клетки-предшественники;
ЭКП - эндотелиальные клетки предшественники;
ЭСК - эмбриональные стволовые клетки;

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ АНГИО/МИОГЕНЕЗ КАК СРЕДСТВО РЕВАСКУЛЯРИЗАПИИ И РЕГЕНЕРАЦИИ ИШЕМИЗИРОВАННЫХ ОРГАНОВ
1. Пересадка гена как инструмент индукции терапевтического роста сосудов.
1.1. Векторы для пересадки генов.
1.2. Способы пересадки генов при заболеваниях сосудов.
1.3. Терапевтическая реваскуляризация.
1.4. Факторы, используемые для стимуляции терапевтического роста сосудов.
1.4.1. Факторы роста сосудистого эндотелия (УЕСР).
1.4.2. Ангиопоэтины.
1.4.3. Факторы роста фибробластов (ГОР).
1.5. Другие факторы, участвующие в росте сосудов.
2. Исследование стволовых клеток и клеток-предшественников для стимуляции реваскуляризации и регенерации органов.
2.1. Эмбриональные стволовые клетки человека.
2.2. Гематопоэтичсские стволовые клетки.
2.3. Мезенхимальные стволовые клетки.
3. Стратегия введения терапевтических агентов для стимуляции ангио/миогенеза.
3.1. Системное введение.
3.2. Непосредственное введение в миокард.
3.3. Транскутанное введение в миокард (Интервенционное интрамиокардиальное введение (трансэндокардиально) Р1МО
3.4. Интраперикардиальное и периваскулярное введение.
3.5. Интракоронарное введение.
3.6. Ретроградное введение в коронарные вены.
3.7. Сравнительные испытания различных методов введения.
3.8. Альтернативные методы введения.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Методы экспериментальных исследований.
2.1.1. Гистологическая оценка экспрессии факторов ангиогенеза и рецепторов к ним в ткани миокарда у больных ИБС.
2.1.2. Электронная микроскопия интраоперационной биопсии миокарда зоны, расположенной рядом с постинфарктной аневризмой левого желудочка.
2.1.3. Получение плазмидной конструкции, содержащей ген васкулоэндотелиального фактора роста VEGF165 .
2.1.4. Исследование токсичности и переносимости препарата ангиостимулин (ген VEGF165 человека).
2.1.5. Исследование эффективности ангиостимулина in vivo в тесте с матригелем.
2.1.6. Исследование эффективности ангиостимулина на модели ишемии нижних конечностей.
2.1.7. Методика оценки эффективности препаратов по плотности капиллярной сети в ишемизированной ткани.
2.1.8. Метод выделения и получения аутологичных клеток-предшествеиников CD 133+
2.1.9.Метод проточной цитофлюориметрии (FACS).
2.1.10.Метод оценки активности колопиеобразования.
2.1.11 .Иммуноцитохимический анализ.
2.2. Методы исследования клинического применения ангиостимулина и стволовых клеток-предшественников CD 133+.
2.2.1.Общая характеристика больных.
2.2.2. Методы исследования в клинике.
1) Электрокардиографическое исследование.
2) Эхокардиографическое исследование (ЭхоКГ) исследование.
3) Проба с физической нагрузкой (тредмил - тест).
4) Рентгеноэндоваскулярные методы исследования коронарных артерий и артерий нижних конечностей.
5) Синхронизированная с ЭКГ однофотонная эмиссионная компьютерная томография миокарда (сиихро-ОФЭКТ).

иглой, соединенной с катетером. Аналогичная конструкция Stiletto дополнена приемником МР на катетере, позволяющим более точно нацеливать инъекцию. В системе BioCardia для достижения большей точности инъекции применяется гибкий направляющий катетер, а соединенная с катетером для введения игла имеет подвижный ограничитель, позволяющий точно регулировать глубину инъекции.
Эффективность всех вышеописанных приспособлений для введения генетических препаратов и клеток была проверена в экспериментах на животных (преимущественно на свиньях) и в клинических испытаниях (Komowski R . и соавт.,1999; Naimark W. и соавт., 2003; Fuchs S. и соавт., 2001; Vale Р. и соавт., 2001; Hill J. и соавт., 2003; Rezaee М. и соавт., 2001; Grube Е. и соавт., 2002).
В связи со все более широким внедрением P1MD в клиническую практику (Laham R. и соавт., 2001; Grossman Р. и соавт., 2002) несомненно потребуют серьезного внимания вопросы, связанные с проникновением в миокард, аритмией, накоплением препарата в тканях и инертностью материала катетера. Однако уже сейчас многочисленные преимущества PIMD позволяют предсказать этому методу большое будущее в сфере миокардиального ангиогенеза и клеточной кардиомиопластики.
3.4, Интраперикардиальное и периваскулярное введение
Перикардиальное пространство и прилегающие ткани могут служить местом накопления и источником последующего поступления препарата в миокард. Это их свойство было использовано при применении целого ряда фармпрепаратов (96-99). Доступ к этому постранству и прилегающим эпикардиальным периваскулярным тканям осуществляется посредством менее инвазивных и практичных процедур, позволяющих избежать пнтрамиокардиальной пенетрации, интраваскулярных или внутрижелудочковых манипуляций и связанных с ними механических, воспалительных и иммунологических последствий. Поскольку этот метод не предусматривает непосредственного введения в миокард, он в меньшей степени пригоден для введения клеток, однако удобен для стимуляции ангиогенеза в сочетании с хирургическими и транскутанными технологиями.
В клинике данный подход использовали для введения несвязанного FGF в участки эпикарда, примыкающие к пораженной левой передней нисходящей артерии (LAD), у 20 больных с шунтом левой внутренней маммарной артерии (LIMA) (Shumacher В. и соавт., 1998; Pecher Р. и соавт., 2000). Ангиографическое обследование