Генетические особенности системы гемостаза у больных артериальной гипертонией Республики Мордовия

• Автор: Семенова, Светлана Владимировна
• Шифр специальности: 14.01.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 89 с. : 11 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. Обзор литературы 1Л. Современные представления о генетической предрасположенности развития осложнений артериальной гипертонии

1.2. Мутация Лейдена

1.3. Ген ингибитор активатора плазминогена

1.4. Молекулярно-генетические основы гипергомоцистеинемии

1.5. Мутация гена протромбина 020210А

1.6. Полиморфизм гена рецептора мембраны тромбоцитов — гликопротеина ПЬ/Ша

1.7. Полиморфизм гена ангиотензин-превращающего

фермента
Г лава 2. Материалы и методы исследования
Глава 3. Результаты собственных исследований:
3.1. Изучение полиморфизма гена V фактора свертывания крови у больных артериальной гипертонией в Республике Мордовия
3.2. Анализ распределения частоты генотипов гена ингибитора активатора плазминогена у больных артериальной гипертонией
в Республике Мордовия
3.3. Изучение полиморфного варианта гена метилентетрагидро-фолатредуктазы в позиции С677Т у больных артериальной гипертонией в Республике Мордовия
3.4. Анализ распределения частоты генотипов гена метилентетра-гидрофолатредуктазы А1298С у больных артериальной гипертонией в Республике Мордовия
3.5. Изучение полиморфизма гена протромбина у больных артериальной гипертонией в Республике Мордовия
3.6. Анализ распределения частоты генотипов гена рецептора тромбоцитов - гликопротеина ИЬ/Ша у больных артериальной гипертонией в Республтке Мордовия
3.7. Изучение полиморфизма гена ангиотензин-превращающего фермента у больных артериальной гипертонией в Республике Мордовия
3.8. Анализ комбинаций неблагоприятных генотипов генов системы гемостаза у больных артериальной гипертонией в Республике Мордовия
3.9. Анализ неблагоприятных комбинаций генов системы тромбогене-за и гена ангиотензин-превращающего фермента у больных артериальной гипертонией в Республике Мордовия
Г лава 4. Обсуждение
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АГ - артериальная гипертония АД- артериальное давление АФД - аденозиндифосфат АПФ - ангиотензин-превращающий фермент ВТЭ - венозные тромбоэмболии ГЦ - гомоцистеин
ДАД - диастолическое артериальное давление
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ЗСЛЖ - задняя стенка левого желудочка
ЗСН - застойная сердечная недостаточность
ИБС - ишемическая болезнь сердца
ИМ - инфакрт миокарда
КДР - конечный диастолический размер
КСР - конечный систолический размер
ЛП - левое предсердие
МЖП - межжелудочковая перегородка
ОНМК — острое нарушение мозгового крообращения
ПЦР - полимеразноцепная реакция
САД - систолическое артериальное давление
ФВ - фракция выброса
ЦВЗ - цереброваскулярные заболевания
АСЕ - ангиотензин-превращающий фермент
АРС — активированный протеин С
GP - гликопротеин
FV - фактор V свертывающей системы крови MTHFR - метилентетрагидрофолатредуктаза РА1-1 — ингибитор активатора плазминогена

цветным либо слабоокрашенным.
К клеточному осадку добавляли 400 мкл буфера для протееиназы К1 (ЮмМ Трис-С1, pH 7,4, 10 мМ ЭДТА, 150 мМйаС1), содержащего 0,5% Б08 и 100 мкг/мл протеиназы К. Фермент добавляли из сток-раствора (20 мг/мл в воде, хранить при -20°С) непосредственно перед выделением. Инкубировали 15-60 мин при 50%С, после чего ресуспендировали осадок пипетированием, стараясь не создавать пены, и оставляли при 50° С на 12-18 часов.
Затем добавляли равный объем (400 мкл) смеси фенол: хлороформ: изоамиловый спирт (25:24:1), хорошо размешивали на вортексе и оставляли на 10 мин при комнатной С, периодически перемешивая. После разделяли фазы центрифугированием 15 сек при 12000-14000 об/мин. Верхнюю водную фазу переносили в новую пробирку, добавляя туда же 400 мкл хлороформа, хорошо перемешивали на вортексе и разделяли фазы центрифугированием 15 сек при 12000-14000 об/мин. Верхнюю водную фазу вновь переносили в новую пробирку, измеряя объем и добавляли 1/10 объема ЗМ ацетата Ыа*, pH
5,2 и 2,5 объема 96% этанола. Пробирку оставляли на 20 мин при -20С, после чего осаждали ДНК центрифугированием в течение 10 мин при 12000-14000 об/мин при 4°С-25°С и удаляли супернатант.
К осадку добавляли 1 мл 70% этанола, аккуратно перемешивали, центрифугировали 2 мин на максимальных оборотах микрофуги, супернатант удаляли, а осадок высушивали на воздухе при комн. 1° до исчезновения видимых следов этанола (примерно 20-30 мин). Осадок растворяли в 50 мкл ТЕ-буфера* (ЮмМ Трис-НС1, pH 8,0, 1мМ ЭДТА) при 37°С в течение 30 мин с периодическим перемешиванием, затем измеряли концентрацию ДНК флуоресцентным методом с красителем НовЬвй В конце раствор ДНК доводили ТЕ-буфером до концентрации 200 нгмкл. Хранили ДНК на -20°С
2.2.2. Метод определения исследуемых мутаций генов системы гемостаза
Анализ полиморфных маркеров проводили методом ПЦР с последую-