Значение факторов врожденного иммунитета в патогенезе наружного генитального эндометриоза I-II стадии у пациенток с бесплодием и обоснование использования препарата глюкозаминилмурамилдипептида в комп

• Автор: Романова, Светлана Владимировна
• Шифр специальности: 14.01.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Иваново
• Количество страниц: 130 с. : 11 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Современные представления о патогенезе бесплодия при І-ІІ стадиях наружного генитального эндометриоза
1.2. Участие факторов врождённого иммунитета в развитии наружного генитального эндометриоза и связанного с ним бесплодия

1.3. Современные подходы к лечению бесплодия при наружном

генитальном эндометриозе

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Организация работы и объем исследований

2.2. Методы исследования

ГЛАВА 3. СРАВНИТЕЛЬНАЯ КЛИНИЧЕСКАЯ
ХАРАКТЕРИСТИКА ОБСЛЕДУЕМЫХ ЖЕНЩИН
ГЛАВА 4. ХАРАКТЕРИСТИКА И ИЗУЧЕНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ МОНОЦИТОВ У ПАЦИЕНТОК С БЕСПЛОДИЕМ ПРИ 1-11 СТАДИЯХ НАРУЖНОГО ГЕНИТАЛЬНОГО ЭНДОМЕТРИОЗА И ВЛИЯНИЕ ГМДП (ГЛЮКОЗАМИНИЛМУРАМИЛДИПЕПТИДА)
НА ЕГО ПАРАМЕТРЫ IN VITRO
4.1. Особенности синтеза сигнальных рецепторов и внутриклеточной продукции провоспалительных цитокинов моноцитами периферической крови у женщин с бесплодием при I-II стадиях наружного генитального эндометриоза
4.2. Особенности синтеза и сывороточного содержания RAGE у женщин
с бесплодием при I-1I стадиях наружного генитального эндометриоза
4.3. Изучение in vitro влияния ГМДП (Глюкозаминилмурамилдипептид) на функциональное состояние моноцитов пациенток с бесплодием
при I-II стадиях наружного генитального эндометриоза

ГЛАВА 5. ВЛИЯНИЕ ТЕРАПИИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИММУНОМОДУЛЯТОРА ГМДП НА РЕПРОДУКТИВНУЮ ФУНКЦИЮ И ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ЖЕНЩИН С БЕСПЛОДИЕМ ПРИ 1-И СТАДИЯХ НАРУЖНОГО ГЕНИТАЛЬНОГО ЭНДОМЕТРИОЗА
5.1. Влияние терапии с использованием иммуномодулятора ГМДП на репродуктивную функцию женщин с бесплодием при 1-П стадиях наружного генитального эндометриоза
5.2. Влияние терапии с использованием иммуномодулятора ГМДП на функциональное состояние моноцитов периферической крови
у женщин с бесплодием при 1-П стадиях наружного генитального эндометриоза
5.3. Алгоритм иммунологического обследования и назначения курса иммуномодулирующей терапии в раннем послеоперационном периоде пациенткам с бесплодием при 1-П стадиях наружного генитального
эндометриоза
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы исследования:
Эндометриоз - одно из наиболее распространенных гинекологических заболеваний женщин репродуктивного возраста (Acien Р, Velasco I., 2013). Согласно последним данным, эндометриозом во всем мире страдает каждая 10-я женщина репродуктивного (Адамян Л.В., 2013; Macer М. L., 2012), причем у 30%-50% всех женщин с эндометриозом диагностируется бесплодие (Боровкова Л.
В., 2005; Missmer S.A., 2004; Giudice L.C., 2004). Однако механизмы, определяющие нарушение репродуктивной функции у пациенток с эндометриозом, до конца не установлены. Особый интерес представляет бесплодие, ассоциированное с «малыми» формами наружного генитального эндометриоза, поскольку несмотря на минимальные анатомические изменения органов малого таза, у этих пациенток отмечается высокая частота бесплодия (Марченко Л.А., 2007).
В последние годы увеличилось число сообщений о важной роли Особый интерес представляет бесплодие, ассоциированное с наружным генитальным эндометриозом I-II стадии, поскольку, несмотря на минимальные анатомические изменения органов малого таза, у этих пациенток отмечается высокая частота бесплодия иммунных нарушений в патогенезе эндометриоза и связанного с ним бесплодия. Во многих работах подчеркивается важная роль клеток фагоцитарного ряда в процессах, определяющих механизмы формирования эндо-метриоидных очагов, однако практически во всех работах, посвященных этому вопросу, оцениваются макрофаги перитонеальной жидкости, (Lousse J. С., 2012; Dmwoski Р. W., 2006). Менее изученными при эндометриозе остаются особенности периферических клеток фагоцитарного ряда, в частности моноцитов, хотя ряд исследователей указывает на важную роль системного воспаления в патогенезе эндометриоза (Gmyrek G. В., 2008). В доступной нам литературе мы встретили лишь единичные работы, посвященные изучению этой проблемы. Установлено, что для моноцитов пациенток с наружным генитальным эндометриозом характерно нарушение экспрессии адгезионых рецепторов и продукции

Оценка функционального состояния периферических моноцитов методом проточной цитометрии
Мембранную экспрессию рецепторов и внутриклеточный синтез цитоки-нов моноцитами определяли с помощью моноклональных антител (мАТ) методом двухцветной проточной цитофлюориметрии на приборе FACScan (Becton Dickinson, USA). В качестве флюорохромной метки использовали флюоресцеин изотиоционат (FITC) и фикоэритрин (РЕ). В исследовании использовали следующие мАТ: коньюгированные с FITC анти-Т1Л12, CD 120а антитела (Beckman Coulter, USA), коньюгированные с РЕ анти-CD 14 антитела (КлоноСпектр, Москва). Внутриклеточную продукцию цитокинов оценивали с помощью следующих мАТ: коньюгированные с FITC анти-human-IL-1 ß антитела и коньюгированные с РЕ анти-human-TNFa антитела (Beckman Coulter, USA).
Процедуру окрашивания и фиксации клеток проводили стандартным способом в соответствии с указаниями фирмы-разработчика. При оценке внутриклеточной продукции цитокинов моноцитами крови предварительно проводили процедуру фиксации и пермеабилиазации клеточной мембраны с использованием коммерческого набора Fixative Solution IOTest®3 lOx Concentrate (Beckman Coulter, USA). He менее 10000 клеток анализировалось в каждом образце. Анализ результатов проводили в программе «CELLQuest Pro» (Becton Dickinson, USA). Анализировали клетки в моноцитарном гейте, который устанавливали на основании окрашивания клеток анти-CD 14 антителами.
Проведение количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени
Для количественного определения экспрессии мРНК NOD2 и RAGE моноцитами периферической крови использовали метод полимеразной цепной реакции (PCR) в масштабе реального времени. Предварительно проводили выделение чистой популяции моноцитов из фракции МНК периферической крови методом магнитной сепарациии с использованием магнитный частиц, коньюги-рованных с анти-CD 14 антителами (Dynabeads® CD 14, Invitrogen by Life Technologies AS, Oslo, Norway) в соответствии с инструкцией фирмы-разработчика.