Влияние флавоноидов на механизмы развития окислительного стресса при токсических поражениях печени

• Автор: Сергеева, Елена Олеговна
• Шифр специальности: 14.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Пятигорск
• Количество страниц: 202 с. : 39 ил.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Механизмы развития окислительного стресса и его роль в патогенезе токсических поражений печени
1.2 Механизм действия флавоноидов и их применение при токсических поражениях печени

ВЫВОДЫ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Характеристика объектов исследования

2.2 Лабораторные животные и экспериментальные модели

2.3 Постановка опытов и основные экспериментальные серии

2.3.1 Изучение влияния флавоноидов на интенсивность перекисного окисления липидов и антиоксидантную систему печени в условиях острого ССЬ, -гепатоза

2.3.2 Изучение влияния флавоноидов на продукцию N0

2.3.3 Изучение влияния флавоноидов на интенсивность перекисного окисления липидов и антиоксидантную систему печени при курсовой алкоголизации
2.3.4 Изучение влияния курсового введения флавоноидов на интенсивность перекисного окисления липидов и антиоксидантную систему печени у здоровых животных
2.3.5 Изучение влияния флавоноидов на ферменты микросомальной системы, состояние митохондриальных процессов и энергообмена в печени при остром ССЦ-гепатозе
2.3.6 Изучение влияния флавоноидов на ферменты микросомальной системы, состояние митохондриальных процессов и энергообмена в печени при курсовой алко-голизаии
2.3.7 Изучение влияния курсового введения флавоноидов на ферменты микросомальной системы, состояние митохондриальных процессов и энергообмена в печени
у здоровых животных
2.3.8 Определение острой токсичности
2.3.9 Обоснование выбора доз исследуемых веществ
2.4 Методы исследования
2.4.1 Оценка поражения печени по биохимическим показателям

2.4.1.1 Определение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови
2.4.1.2 Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови
2.4.1.3 Определение содержания общего билирубина в сыворотке крови
2.4.1.4 Определение содержания триглицеридов в сыворотке крови и печени
2.4.1.5 Определение содержания фосфолипидов в печени
2.4.1.6 Определение содержания гликогена в печени
2.4.1.7 Определение содержания глюкозы в сыворотке крови
2.4.2. Оценка интенсивности перекисного окисления липидов (ПОЛ)
2.4.2.1 Определение содержания ТБК-активных продуктов в сыворотке крови
2.4.2.2 Определение содержания ТБК-активных продуктов в гомогенате печени
2.4.2.3 Определение содержания диеновых конъюгатов в гомогенате печени
2.4.2.4 Определение интенсивности спонтанного и индуцированного ПОЛ
2.4.3. Оценка состояния эндогенной антиоксидантной системы
2.4.3.1 Определение активности супероксидцисмутазы
2.4.3.2 Определение активности каталазы
2.4.3.3 Определение содержания восстановленного глутатиона в печени
2.4.3.4 Определение активности глутатионпероксидазы в печени
2.4.3.5 Определение активности глутатион-Б-трансферазы в печени
2.4.3.6 Определение НАДФ+-редуктазпой активности печени
2.4.3.7 Определение активности глутатионредуктазы в печени
2.4.3.8 Определение общей антиокислительной активности сыворотки крови
2.4.4 Оценка резистентности биомембран и окислительно-восстановительного баланса тиолов
2.4.4.1 Определение активности кислой фосфатазы в сыворотке крови
2АЛ.2 Определение интенсивности спонтанного и перекисного гемолиза эритроцитов
2.4.4.3 Определение активности 5'-нуклеотидазы в постъядерной фракции печени
2.4.4.4 Определение активности фосфолипазы А2 в сыворотке крови
2.4.4.5 Определение содержания общих, белковых и небелковых сульфгидрильных (БН-) групп в гомогенате печени
2.4.5 Оценка активности ферментов микросомальной системы печени
2.4.5.1 Определение N—деметилазной активности
2.4.5.2 Определение п-гидроксилазной активности
2.4.5.3 Изучение активности оксидоредуктаз с добавлением акцепторов электронов: феррицианида калия, неотетразолия синего

2.4.5.4 Определение активности глюкозо - 6 - фосфатазы
2.4.6 Оценка интенсивности митохондриальных процессов в печени
2.4.6.1 Определение активности сукцинатдегидрогеназы
2.4.6.2 Определение активности цитохром-с-оксидазы
2.4.6.3 Определение 1ф*2+-АТФазной активности
2.4.7 Оценка показателей энергетического обмена в печени
2.4.7.1 Определение содержания глюкозы в печени
2.4.7.2 Определение содержания пировиноградной кислоты в печени
2.4.7.3 Определение содержания молочной кислоты в печени
2.4.7.4. Определение активности лактатдегидрогеназы в печени
2.4.7.5 Определение содержания АТФ в печени
2.4.8 Определение содержания ЕГО-радикалов методом ЭПР
2.4.9 Выделение постьядерной, микросомальной и митохондриальной фракций печени
2.4.10 Определение антиоксидантной активности индивидуальных флавоноидов в модельной системе
2.5 Статистическая обработка результатов эксперимента
2.6 Используемые реактивы
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 3 ВЛИЯНИЕ ФЛАВОНОИДОВ НА РАЗВИТИЕ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА В УСЛОВИЯХ ОСТРОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ ТЕТРАХЛОРМЕТАНОМ
3.1 Влияние флавоноидов на интенсивность перекисного окисления липидов и анти-оксидантную систему при остром СС14- гепатозе у крыс
3.2 Влияние флавоноидов на митохондриальные процессы, микросомальную систему и эпергообмен в печени при остром СС14 - гепатозе у крыс
3.3 Сравнительная оценка гепатозащитной активности флавоноидов при остром ССЦ
- гепатозе
ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ 3
ГЛАВА 4 ВЛИЯНИЕ ФЛАВОНОИДОВ НА РАЗВИТИЕ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА ПРИ КУРСОВОЙ АЛКОГОЛИЗАЦИИ У КРЫС
4.1 Влияние флавоноидов на биохимические показатели состояния печени, интенсивность перекисного окисления липидов и антиоксидантную систему при курсовой алкоголизации у крыс

рофосфатоксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием зквимолярного количества перекиси водорода. Пероксидаза катализирует окисление хромогенных субстратов перекисью водорода в присутствии хлорфенола с образованием окрашенного продукта, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна концентрации ТРГ в пробе. Для определения ТРГ использовали стандартные наборы реактивов производства «ДДС» и «Ольвекс Диагностикум».
Количество триглицеридов в гомогенате печени (мкмоль/г) измеряли по Gottfrieds S.P., Rosenberg В. в модификации Сентебовой [132]. Станадартный раствор триолеина для определения содержания ТРГ содержал 80% воды для устранения ошибки экстрагирования. Гомогенат печени готовили на 100 мМ трис-HCl буфере, pH 7,4 в соотношении 1:7.
2.4.1.5 Определение содержания фосфолипидов (ФЛ) в печени
Использовали метод, основанный на определении концентрации неорганического фосфата (Р„), освободившегося при кислотном гидролизе. Фосфолипиды извлекали из гомо-гената печени хлороформно-метанольной смесью 2:1 [187]. Содержание фосфолипидов выражали в мг неорганического фосфора, выделившегося после минерализации липидов по Фиске-Суббароу, как описано [5], на 1 г ткани печени. Измерение содержания неорганического фосфата проводили реакцией с молибдатом аммония [80] и рассчитывали по калибровочному графику. Гомогенат печени готовили, как описано выше.
2.4.1.6 Определение содержания гликогена в печени
Содержание гликогена в печени определяли по реакции с фенолом в кислой среде после щелочного гидролиза гликогена, содержащегося в навеске печени и выражали в г/кг печени [239].
2.4.1.7 Определение содержания глюкозы в сыворотке крови
Содержание глюкозы определяли в сыворотке крови ферментативным методом [80], используя стандартные наборы реактивов "Биоконт, Агат", и выражали в ммоль/л сыворотки крови. Расчет производили по стандартному раствору глюкозы.
2.4.2. Оценка интенсивности перекисного окисления липидов (ПОЛ)
2.4.2.1 Определение содержания ТБК-активных продуктов в сыворотке крови
Определение вторичных продуктов ПОЛ проводили по реакции с тиобарбитуровой кислотой с использованием диагностического набора "Агат-Мед". Принцип метода основан на том, что продукты перекисного окисления липидов в присутствии ортофосфосфата обра-