Племенные ресурсы быков-производителей племпредприятий Российской Федерации по гену каппа-казеина

• Автор: Ганченкова, Татьяна Борисовна
• Шифр специальности: 06.02.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: п. Лесные Поляны Московской обл.
• Количество страниц: 147 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Каппа-казеин и методы диагностики его полиморфизма

1.2. Полиморфизм каппа-казеина у пород крупного рогатого скота

1.3. Связь генотипов каппа-казеина с хозяйственно полезными признаками животных

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Анализ полиморфизма гена каппа-казеина быков-производителей с помощью ДНК-диагностики
3.2. Племенные ресурсы быков-производителей черно-пестрой породы по гену каппа-казеина
3.3. Племенные ресурсы быков-производителей голштинской породы по гену каппа-казеина
3.4. Племенные ресурсы быков-производителей холмогорской породы по гену каппа-казеина
3.5. Племенные ресурсы быков-производителей симментальской породы по гену каппа-казеина
3.6. Племенные ресурсы быков-производителей красно-пестрой породы
по гену каппа-казеина
3.7. Генотипы каппа-казеина у быков-производителей прочих пород
ВЫВОДЫ
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРИЗВОДСТВУ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность. В течение многих лет главной задачей отрасли молочного животноводства являлось увеличение продуктивности животных. Оценка качества молока ограничивалась показателем процентного содержания жира. Изменение взглядов на диетическое питание привело к изменению основ селекции молочного скота. В 2004 году введен новый ГОСТ Р52054-2003 «Молоко натуральное коровье - сырье», предусматривающий контроль содержания в молоке не только жира, но и белка. Возрастающее значение приобретает пригодность молока к выработке белковомолочных продуктов. Эффективность селекции на улучшение качественных показателей молока и его технологических свойств можно значительно повысить путем использования новых генетических методов.
Исследованиями отечественных и зарубежных ученых установлена взаимосвязь генотипа коров- по локусу каппа-казеина с признаками белковомолочности и технологических свойств молока (D.V. Мс Lean et al, 1984; J. Schaar, 1984, 1985; G. Pagnacco, F. Caroli, 1987). Молоко коров с генотипом AB и ВВ каппа-казеина обладает более высоким содержанием белка и- под действием сычужного фермента свертывается раньше, чем молоко коров с генотипом АА. Наличие варианта В каппа-казеина позволяет увеличить выход белковомолочных продуктов и улучшить, их качество. Таким образом, генотип каппа-казеина является важным селекционным критерием для молочных пород крупного рогатого скота.
Ранее генотип каппа-казеина не использовали в селекции, так как его полиморфизм можно было определить только у лактирующих коров, а быки-производители могли быть оценены только путём анализа молока их дочерей. Благодаря методу ДНК-диап га сти к и стало возможным идентифицировать генотип каппа-казеина у быков-производителей, что позволяет эффективно использовать генотипирование по локусу гена каппа-казеина в селекционном процессе.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является-изучение генотипов каппа-казеина у быков-производителей на племпредприятиях Российской Федерации с использованием ДНК-диагностики и характеристика быков с различными генотипами.
Для достижения цели поставлены следующие задачи:
• Определить генотипы каппа-казеина у быков — производителей
. - чёрно-пёстрой породы;
- голштинской породы;
- холмогорской породы;
- симментальской породы;
- красно-пёстрой породы.
• Провести сравнительную оценку быков-производителей с различными генотипами каппа-казеина по молочной продуктивности- женских предков и дочерей
• Определить генотипы каппа-казеина у быков прочих пород (ярославской; швицкой, сычевской и, др.).
Научная новизна. Выявлен полиморфизм и установлена частота встречаемости, генотипов и аллельных вариантов каппа-казеина у быков-производителей чёрно-пёстрой, холмогорской, голштинской, симментальской, красно-пёстрой и других пород на племпредприятиях Российской Федерации с использованием методов ДНК-диагностики. Проведена сравнительная оценка быков с различными генотипами каппа-казеина, по показателям молочной , продуктивности женских предков и дочерей.
Практическая значимость. Полученные данные о наличии быков-производителей с различными генотипами каппа-казеина на племпредприятиях открывают возможность использования генетических методов для совершенствования пород скота по качеству молока и его технологическим свойствам. Частота аллеля В каппа-казеина в стадах может

г) Осадили ДНК этанолом, добавив 2 объема охлажденного 95 % этанола к водной фазе. Осторожно перемешивали. Выделенную ДНК в виде «медузы» переносили в 70 % спирт и промывали. Высушинную ДНК на воздухе растворяли в 1х ТЕ буфере или в дистиллированной воде до концентрации примерно 0,5 мкг/мл.
Выделение ядерной ДНК из спермы:
1. Небольшое количество спермы объёмом не более 20 мкл промывали буфером состава: 100 мМ ЭДТА, 100 мМ NaCI, 50 мМ Трис НС1 (рН8.0) для освобождения от семенной жидкости и осаждали центрифугированием при 10000 об/мин в течение 5 минут в микроцентрифуге типа «Эппендорф».
2. Лизис препарата проводили в лизис-буфере, содержащем ЮмМ ДТТ (дитиотрейтол), 1 SDS, 100 мМ ЭДТА, 100 мМ NaCI, 50 мМ Трис НС1 (рН8.0) с добавлением протеиназы . К в конечной концентрации 1мг/мл. Объём лизис-буфера составил 700 мкл. Лизис проводили при 55 - 60°С в течение ночи, причем в период первого часа инкубации препарат тщательно перемешивают встряхиванием каждые 5 минут.
3. Экстракцию ДНК водной фазы проводят поочерёдно равным объемом фенола, затем равным объёмом Extract буфера (смесь фенола, хлороформа и изоамилового спирта в соотношении 25:24:1), хлороформ'с изоамиловым спиртом (24:1) и дважды эфиром с центрифугированием.
4. Для осаждения ДНК к водной фазе добавляли 0,7 объёма изопропанола и центрифугировали при 12000 об/мин на микроцентрифуге в течение 10 минут.
5. Осадок растворяли в 100 - 200 мкл воды. После полного растворения добавляли 3 М ацетат натрия до концентрации 0,3 М. Далее, осаждали ДНК
2,5 объёмами 95% этанола. Выделенную ДНК промывали 70% этанолом, высушивали на воздухе и растворяли в дистиллированной воде.
Качество и концентрацию ДНК оценивали электрофоретическим методом в 1% агарозном геле. Аликвоты проб ДНК смешивали с буфером