Изучение антипатогенной активности гриба Fusarium sambucinum AF-967

• Автор: Дорофеев, Дмитрий Александрович
• Шифр специальности: 06.01.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Б. Вязёмы
• Количество страниц: 107 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Глава I. Обзор литературы

1.1. Грибы рода Fusarium, распространение и вредоносность

1.2. Биологическая защита растений

1.2.1. Бактериальные средства защиты растений

1.2.2. Использование грибов в защите растений

1.2.3. Использование непатогенных штаммов грибов рода Fusarium

Глава II. Объекты и методы исследований

2.1. Объект исследований

2.2. Культивирование гриба
2.3. Определение прорастаемости конидий Fusarium sambucinum AF-967
2.4. Хранение конидий F. sambucinum AF-967 на инертных субстратах
2.5. Получение экссудатов и метанольного экстракта из
прорастающих спор F. sambucinum AF-9'
2.6. Получение биомассы и фильтрата культуральной жидкости
F. sambucinum AF-
2.7. Экстракция биомассы F. sambucinum AF-967 метанолом
2.8. Экстракция лиофилизированного мицелия
F. sambucinum AF-967 метанолом
2.9. Выделение фракции высокомолекулярных метаболитов
мицелия F. sambucinum AF-
2.10. Получение метанольно-хлороформного экстракта лиофилизированного мицелия F. sambucinum AF-
2.11. Получение этанольного экстракта мицелия F. sambucinum AF-
2.12. Вегетационные опыты
2.13. Определение биологической активности экстрактов
F. sambucinum AF-967 in vitro
2.14. Получение каллусных и суспензионных культур клеток пшеницы

2.15. Оценка защитного действия лиофилизированной фракции высокомолекулярных метаболитов мицелия F. sambucinum AF-967 in vitro..
2.16. Метод определения эргостерола в растительных тканях
Глава III. Изучение трофических потребностей гриба
Fusarium sambucinum AF-
3.1. Изучение возможности хранения конидий гриба
F. sambucinum AF-967 на инертных субстратах
Глава IV. Изучение антипатогенной активности метаболитов
Fusarium sambucinum AF-
4.1. Разработка метода проращивания конидий F. sambucinum AF-
в жидкой среде
4.2. Оценка активности метаболитов F. sambucinum AF-
на стадии прорастания спор
4.3. Изучение антипатогенной активности метаболитов
F. sambucinum AF-967 на стадии активного роста биомассы
4.3.1. Оценка антипатогенной активности метанольного экстракта мицелия F. sambucinum AF-
4.3.2. Оценка антипатогенной активности высокомолекулярных метаболитов мицелия F. sambucinum AF-
4.3.3. Оценка антипатогенной активности метанольнохлороформного экстракта мицелия F. sambucinum AF-
4.3.4. Оценка антипатогенной активности этанольного экстракта
мицелия F. sambucinum AF-
4.3.5. Оценка антипатогенной активности фильтратов культуральной
жидкости F. sambucinum AF-
Глава V. Исследование высокомолекулярной фракции метаболитов
мицелия Fusarium sambucinum AF-
5.1. Исследование активности высокомолекулярных
метаболитов in vitro
5.2. Изучение биологической активности фракции высокомолекулярных
метаболитов в суспензионной культуре клеток пшеницы
Заключение
Выводы
Литература

чашек, а затем оценивали скорость роста колоний (диаметр) по сравнению с контролем.
- Готовили суспензию конидий тест-объекта, фильтровали ее через капрон и разбавляли стерильной водой до 10-15 спор в поле зрения микроскопа на предметном стекле. В растворы метаболитов в серийном разведении с исходной концентрацией вдвое выше, чем в предыдущих двух методах, добавляли споровую суспензию (1 : 1). В контроле суспензию спор смешивали с водой. Споры проращивали на предметных стеклах с водным агаром (см. 2.З.).
Все опыты воспроизведены в трехкратной повторности.
2.14. Получение каллусных и суспензионных культур клеток пшеницы.
В качестве эксплантатов использовали зрелые зародыши трех сортов пшеницы, значительно различающихся по восприимчивости к фузариозу колоса: Безостая-1 - высоко восприимчивый, Фронтана - относительно толерантный и Даха - промежуточный по устойчивости (Сидоров и др., 1996а,б,в; Анпилогова, 1996). Семена пшеницы стерилизовали 10 минут в спирте, затем 25 минут в 1,2% растворе азотнокислого серебра, после чего 6 раз промывали стерильной водой, на 10 минут замачивали в 10% перекиси водорода и снова 5-6 раз промывали стерильной водой. Затем семена, подсушенные стерильной фильтровальной бумагой, раскладывали бороздкой вниз по 6 штук в чашки Петри с агаризованной средой Мурасиге - Скуга (М-С), содержащей 15 мг/л 2,4Д. Через 10-15 дней образовавшиеся каллусы отделяли скальпелем от зерен и помещали на агар М-С с 2 мг/л 2,4Д. Пересевы каллусов проводили через 1-1,5 месяца.
Для получения суспензионной культуры клеток пшеницы 5-8 каллусов диаметром от 4 до 8 мм и общим весом около 0,5 г помещали в 750 мл колбы со 100 мл жидкой среды М-С и инкубировали на ротационной качалке 2-4 недели при 220 об/мин и +26°С. Размножение клеток контролировали визуально по