Проточная система для цитометрирования фитопланктона в природных водных средах

• Автор: Козлов, Александр Владимирович
• Шифр специальности: 05.11.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 194 с.

ПЕРЕЧЕНЬ ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. СОВРЕМЕ1IIЮЕ СОСТОЯНИЕ ПРОБЛЕМЫ ЦИТОМЕТРИИ

ФИТОПЛАНКТОНА

К1. Анализ существующих методов исследования

фитопланктона в природных водных средах

1.2. Неоптические методы

1.3. Кондуктометрические методы определения содержания

планктона в воде

1.3.1. Подсчёт импульсных возмущений кажущегося сопротивления

1.3.2. Интегральное определение массы планктона

1.4. Кондуктометрическое цитомстрирование в клиниколабораторной практике
1.5. Оптические методы
1.5. Е Флуориметрическое цитометрирование фитопланктона
1.5.2. Инфоструктурная модель технологической процедуры проточного флуориметрического цитометрирования взвесей клеток фитопланктона
1.6. Постановка цели и задач исследования
2. ПРИНЦИПЫ РАЗРАБОТКИ ЦИТОМЕТРА ДЛЯ
ЭКОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГ А
2.1. Кондуктометрическое цитометрирование взвесей клеток
фитопланктона
2.2. Характеристики флуоресценции фитопланктона
2.3. Особенности цитометрирования клеток фитопланктона на
основании флуоресценции хлорофилла
Выводы
3. СИСТЕМА ДЛЯ ПРОТОЧНОГО ЦИТОМЕТРИРОВАНИЯ
ВЗВЕСЕЙ КЛЕТОК ФИТОПЛАНКТОНА

3.1. Обобщённая структура двухканальной системы для проточного
цитометрирования фитопланктона
3.2. Структура кондуктометрического канала цитометра
3.2.1. Режим истечения и поле скоростей в апертуре кондуктометрического датчика
3.2.2. Разрешающая способность датчиков системы при определении концентрации частиц
3.3. Оптическая схема флуориметрического канала цитометра
3.4. Энергетический расчёт флуориметрического канала цитометра
3.5. Программа обработки данных, получаемых с датчиков
проточной системы для цитометрирования фитопланктона
Выводы
4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ВЗВЕСЕЙ
КЛЕТОК ФИТОПЛАНКТОНА
4.1. Исследование лабораторных культур фитопланктона с
использованием кондуктометрического канала цитометра
4.2. Цитометрирование фитопланктона с применением флуориметрического и кондуктометрического датчиков цитометра
4.3. Цитометрирование взвеси клеток фитопланктона с
использованием флуориметрического канала цитометра
4.4. Инфоструктурная модель технологической процедуры проточного цитометрирования взвеси клеток фитопланктона на системе с кондуктометрическим и флуориметрическим
датчиками
Выводы
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

ПЕРЕЧЕНЬ ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ФП - фитопланктон
КОС - коэффициент ошибки из-за совпадения
БТС - биотехническая система
ПУЭ - подсистемы управления экспериментом
ФК - флуориметрический канал
КК - кондуктометрический канал
ПВИ - подсистема возбуждающего излучения
КФК - кювета флуориметрического канала
ПЕГИ - подсистемы приёма излучения
ПЦОиПД - подсистема цифровой обработки и передачи данных ПФТВ - подсистема формирования токового воздействия ППИсЭ - подсистема приёма импульсов с электродов ППРИ - подсистема предъявления результатов исследования ВЦ - визуальное цитометрирование
КПЦ - кондуктометрическое проточное цитометрирование ФНЦ - Флуориметрическое проточное цитометрирование ИФ - интенсивность флуоресценции

деления клетки имеет световую зависимость. Прохождение полного цикла клеткой требует экспозиции светом больше чем 6 часов, возможно, способствует накоплению фактора инициации, который даёт возможность начаться синтезу ДНК. Исследование с помощью проточной цитометрии показало, что, клетки, однажды прошедшие весь цикл, завершают цикл в темноте, так что митоз - это не зависящий от света этап. Т. М. Lefort с коллегами использовали проточную цитометрию ДНК, для изучения блокады цикла клетки добавочным пищевым фактором (В 12-недостаточность) .
Использование рибосомных зондов рибонуклеиновой кислоты для идентификации при помощи проточной цитометрии как индивидуальных клеток, так и таксономических групп является очень перспективным. Части рибосомных последовательностей рибонуклеиновой кислоты были хорошо сохранены в процессе эволюции, и различия в рРНК последовательностях коррелируют с эволюционными соотношениями. Флуоресцентно меченые рРНК зонды имеют относительно малую величину и легко проникают в связанные клетки [69]. Там они специфично гибридизируются в целевые последовательности. Это очень полезно для флуоресцентной гибридизации in situ, которая может визуализироваться, с использованием, и проточной цитометрии и микроскопии. Недавно было представлено, использование зондов рРНК для обнаружения разновидностей и групп фитопланктона [70, 71, 72]. М. Lange показал, что целевые области, специфичные для класса Prymnesiophyceae и рода Phaeocystis (Hariot) Lagerheim могли быть идентифицированы посредством 18S рРНК кодированных областей, так же были разработаны два дополнительных зонда. Обнаружение целых клеток гибридизированных с этими зондами, мечеными fluorescein isothiocyanate (FITC) с использованием эпифлуоресцентной микроскопии было затруднено, ввиду того, что автофлуоресценция хлорофиллов, значительно накладывалась на флуоресценцию зондов. Напротив, проточная цитометрия доказала свою