Количественная микротомография раннего эмбриона мыши, подверженного осмотическому стрессу

• Автор: Погорелова, Мария Александровна
• Шифр специальности: 03.03.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 138 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Содержание раздела
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Регуляция клеточного объема
1.1. Транспорт ионов в регуляции объема клетки
1.1.1. Регуляторное уменьшение объема клетки (КУО)
1.1.2.Регуляторное увеличение объема клетки (ЯУ1)
1.2. Осмолиты
1.3. Роль аминокислот в регуляции объема клетки
2. Сигнальная функция осмотического фактора
2.1. Концентрация белков в клетке
2.2. Механическая трансформация цитоскелета
2.2.1. Актиновые филаменты
2.2.2. Микротрубочки
2.3. Растяжение клеточной мембраны
2.4. Мембранный потенциал
2.5. Внутриклеточное значение pH
2.6. Внутриклеточное содержание кальция
2.7. Фосфорилирование белков
2.7.1. Набухание клетки
2.7.2. Сжатие клетки
2.8. Внутриклеточная концентрация хлора
2.9. Экспрессия генов
3. Основные причины изменения клеточного объема
3.1. Изменение осмотических свойств и ионного состава внеклеточной
среды
3.2. Влияние метаболизма на объем клетки
4. Роль осмотического фактора в регуляции функции клетки
4.1. Эпителиальный транспорт
4.2. Регуляция метаболизма
4.3. Выделение гормонов и медиаторов
4.4. Возбудимость и сокращение

4.5. Подвижность клетки
4.6. Пролиферация клеток
4.7. Гибель клетки
5. Водные каналы
5.1. Аквапорины
5.2. Классификация и строение водных каналов
5.3. Транспорт воды через аквапориновые каналы
5.4. Протонная проводимость
5.5. Аквапорины в клетке раннего эмбриона млекопитающих
6. Нарушение развития и регуляция объема раннего эмбриона мыши на 46-47 стадии двух бластомеров
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Получение двухклеточных эмбрионов мыши
Обработка двухклеточных эмбрионов
Подготовка препарата
LSM микротомография и обработка цифрового изображения на
оптическом срезе
Трехмерная реконструкция объекта
РЕЗУЛЬТАТЫ
Результаты количественной микротомографии двухклеточного
эмбриона мыши при гипоосмотических условиях
Результаты количественной микротомографии двухклеточного
эмбриона мыши при гиперосмотических условиях
Результаты ингибиторного анализа
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Количественная микротомография духклеточного эмбриона мыши
Осмотическая реакция эмбриона на гипотонические условия
Начальная фаза набухания эмбриона
Фаза аномального осмотического ответа
Осмотическая реакция эмбриона в условиях, приближенных к
физиологическим
Осмотическая реакция эмбриона на гипертонические условия
Причины аномального поведения эмбриона при гипотоническом стрессе

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ЦИТИРУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
ПРИЛОЖЕНИЕ

выпячивания клеточной мембраны, которое может быть вызвано локальным осмотическим набуханием (Stossel, 1993).
Хемоаттрактанты стимулируют Na+/H+-обмен в нейтрофилах, приводя к их набуханию. Активация NaVbT-обмена и увеличение клеточного объема необходимы для миграции, которая затрудняется действием ингибиторов переносчиков и осмотическим сжатием клетки (Rosengren et al., 1994; Ritter et al., 1996;).
Ингибирование Na+/K+/2C1" -котранспорта так же препятствовало миграции клеток. Кроме того, миграция клеток требует работы Са2+-чувствительных К+-каналов. Ингибирование этих каналов также мешает миграции (Schwab et al., 1994).
Для миграции потребовалось бы асимметричное распределение и/или активация каналов и переносчиков. Возможно, этот процесс включает в себя RVD с активацией калиевых каналов в проксимальной части и RVI с активацией Na+/H+-o6MeHa и/или Na7K+/2Cl" - котранспорта на апикальном конце движущейся клетки (Schwab et al
1995; Hoffmann et al., 2009). В действительности Na+/H+- обменник сконцентрирован на ведущем конце, а К+- каналы — на противоположном конце клетки (Grinstein et al., 1993). Внутри перемещающейся клетки наблюдали градиент Са2+ с наибольшими значениями в задней части клетки (Schwab et al., 1997). Элонгация нервного валика, но не конуса роста нейронов, стимулируется снижением внеклеточной осмолярности (Bray et al., 1991). Таким образом, роль осмотических градиентов в протрузии ведущего края до сих пор является предметом споров (Bray et al., 1991; Stossel, 1993).
4.6. Пролиферация клеток.
Показано, что пролиферация клеток зависит от изменения клеточного объема (Lang et al., 1992; Dubois, Rouzaire-Dubois, 2004). Разнообразие митогенных факторов активирует Na7rr-обменник (Pedersen, 2006), а многие факторы стимулируют Na+/K+/2Cl-KOTpancnopT (Palfrey, O'Donnell, 1992; Ritter, Wöll, 1996; Pedersen et al