Исследование цитомиксиса в микроспорогенезе табака (Nicotiana tabacum L.) разного уровня плоидности

• Автор: Мурсалимов, Сергей Рамильевич
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 130 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Цитомиксис

1.1.1. Цитологические особенности

1.1.2. Распространенность среди высших растений

1.1.3. Причины и последствия цитомиксиса

1.2. Цитоплазматические контакты между растительными клетками

1.2.1. Плазмодесмы

1.2.2. Цитомиктические каналы

1.3. Заключение
Глава 2. Материалы и методы
Глава 3. Результаты и обсуждение
3.1. Влияние уровня плоидности растения на частоту цитомиксиса в микроспорогенезе табака
3.2. Электронно-микроскопический анализ микроспорогенеза диплоидных и тетраплоидных растений табака
3.2.1. Микроспорогенез линии SRI
3.2.2. Ультраструктурные особенности цитомиксиса
3.2.3. Формирование цитомиктических каналов между микроспороцитами

3.3. Состояние ядерной ДНК в микроспороцитах растений табака с высокой и низкой частотой цитомиксиса
Заключение
Выводы
Список публикаций по теме диссертации
Список цитируемой литературы
Приложение

Список использованных сокращений
ЦК - цитомиктические каналы ИУК - индолилуксусная кислота МКМ - материнские клетки микроспор ЭПР - эндоплазматический ретикулум АГ - аппарат Гольджи

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Растительный материал. Исходным материалом для работы послужили растения табака (Nicotiana tabacum L.) линии SRI (2п=48) и мутантные трансгенные тетраплоидные растения линий Res79 и 16.70 (2п=96), полученные в результате сомаклональной изменчивости при культивировании in vitro и характеризующиеся высокой частотой цитомиксиса. (Сидорчук и др., 2004, 2007а). На основе линии SRI были созданы нетрансгенные растения табака разного уровня плоидности (п, Зп, 4п). Все растения выращивали в условиях гидропонной теплицы с фотопериодом 16/8 часов (день/ночь) при температуре 22/18 °С (день/ночь).
Получение гаплоидных растений табака. Гаплоидные растения получали с помощью андрогенеза in vitro. Для этого с диплоидных растений табака срезали стебли с бутонами на второй стадии развития и помещали на 4° С на 1-7 суток (Nitsch, Nitsch, 1969). Далее бутоны стерилизовали 20 минут в 20% «Доместосе» и дважды промывали стерильной водой по 10 минут. В стерильных условиях пыльники извлекали из бутонов и переносили на среду Мурашиге и Скуга (Murashige, Skoog, 1962) (Sigma, USA) с добавлением 0,2 мг/л кинетина, 0,1 мг/л НУК, 10г/л активированного угля, 20 г/л сахарозы, 7 г/л агара, pH 5,7 (доводили до добавления активированного угля) (Nitsch, Nitsch, 1969; Anagnostakis, 1974). Пыльники помещали в условия яркого освещения и повышенной температуры 26-28°С. Через 4 недели предположительно гаплоидные растения, проросшие из пыльников, пересаживали на безгормональную агаризованную среду Мурашиге и Скуга, содержащую 10г/л сахарозы, через 2-4 недели растения высаживали в грунт.
Получение тетраплоидных и триплоидных растений табака
получения тетраплоидных растений табака, семена растений линии SRI проращивали на фильтровальной бумаге, пропитанной 1% раствором