Направленный ангиогенез с использованием клеточных технологий в сочетании с лазерным туннелированием при хронической ишемии конечностей в эксперименте

• Автор: Новрузов, Руслан Байрам оглы
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 86 с. : 19 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК ТЕРМИНОЛОГИЧЕСКИХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1.
(ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1.1 Современный взгляд на проблему хронической ишемии нижних конечностей
1.2 Патоморфологические аспекты развития атеросклероза
1.3 Основные направления хирургического и консервативного лечения хронической ишемии нижних конечностей
1.4 Современные подходы в лечении хронической ишемии нижних конечностей
1.5 Роль стволовых клеток в ангиогенезе
1.6 Предшественники эндотелиальных клеток
1.7 Молекулярные маркеры эндотелиальных клеток
1.8 Ангиогенные факторы роста как предшественники ангиогенеза..
1.9 Лазеры в сердечно-сосудистой хирургии
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Общее описание проведенного исследования
2.2. Методика выполнения модели хронической ишемии нижних конечностей
2.3. Методика проведения экспериментальных исследований
2.4. Исследование микроциркуляторного кровотока нижних конечностей методом лазерной доплеровской флоуметрии
2.5. Методика морфологической оценки зон непрямой реваскуляризации

2.6. Методика оценки хоуминга мононуклеарной клеточной фракции методом включения 5-бромдезоксиуридина (В Фи) в ядра
2.7. Протокол окрашивания и инкубации клеток с ВгсЩ
2.8. Методика забора и получения мононуклеарных костномозговых клеток и разделение её на фракции
2.9. Диагностика клеточного материала
2.10. Методика морфологической оценки экспериментальной ишемии
2.11. Статистические методы исследования
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Верификация экспериментальной “модели” хронической ишемии нижних конечностей
3.2 Результаты лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ)
3.3 Результаты исследования прироста величины перфузии ишемизированной конечности по данным ЛД флуометрии
3.4 Оценка хоуминга мононуклеарной клеточной фракции методом включения 5-бромдезоксиуридина (ВФи) в ядра
3.5 Индукция неоангиогенеза в ишемизированной конечности
3.6 Сравнительный морфологический анализ результатов непрямой реваскуляризации
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ТЕРМИНОЛОГИЧЕСКИХ СОКРАЩЕНИЙ
ХИНК - хроническая ишемия нижних конечностей
ХОЗАНК - хронические обструктивные заболевания артерий нижних
конечностей
ЛДФ - лазерная допплеровская флоуметрия
УЕОБК - рецептор вазоэндотелиального фактора роста
СД - сахарный диабет
ИСК - имплантация стволовых клеток
МЦК - микроциркуляторный кровоток
ГСК - гемопоэтические стволовые клетки
ЭК - эндотелиальные клетки
N0 - оксид азота
ЕРСэ - эндотелиальные клетки- предшественников
Но:УАО - гольмиевый лазер
ШгУАО - неодимовый лазер
ЭК - эндотелиальные клетки
РСК - региональная стволовая клетка
МНФ КМК - мононуклеарная фракция костномозговых клеток

Артериальные ЭК у мышей, птиц выборочно экспрессируют эфрин-В2, нейрофилин-1 (NRP-1) и некоторые молекулы семейства Notch (включая notch3, DLL4 и gridlock) [91, 159, 161 ].
Другие молекулы экспрессируются только клетками венозных сосудов, в основном это эфрин-В4 (EphB4), рецептор артериального EphB2 [82]. Рецептор нейрофилина-2 (NRP-2) экспрессируется клетками венозной стенки, но на более поздних стадиях развития обнаруживается только в лимфатических сосудах [91]. Основываясь на данных регионарной экспрессии в исследованиях мутантных моделей мышей и птиц было показано, что эмбриональная артерио-венозная дифференцировка в действительности предопределена генетически (Wang H. U., Chen Z. F. 1998.). В подтверждение этой идеи, путем анализа пути миграции флюоресцентномеченого ангиобласта, было наглядно доказано, что единичный предшественник ЭК способен развиваться не в смешанный клон, а только в артериальный или венозный [168].
Возможная роль для этих сигнальных молекул в артерио-венозной дифференцировке была предложена после фенотипирования эфрин-В2 и эфрин-В4-нокаутных мышей: эмбрионы демонстрировали симметричные фенотипы, ремоделирование первичного сосудистого сплетения в артерии и вены было застопорено на этапе раннего развития, что привело к гибели на
9.5 сутки (Gerety S. S., Wang H. U., 1999. ), (Wang H. U., Chen Z. F. and Anderson D. J, 1998). Инактивация других сигнальных молекул, экспрессирующихся в артериях (NRP-1 и семейство Notch) также приводило к гибели эмбриона вследствие нарушения сосудистого ремоделирования (Kawasaki T. et al., 1999). У последних не было отмечено ни специфических отличий в строении артерий, ни общих нарушений при формировании больших и малых сосудов.
Исследования мутантных рыб Zebrafish показали привлечение сигнального пути Notch для подавления развития вен на месте артерий: ингибирование этого пути с использованием доминантно-негативного супрессора SuH,