Регионарная специфичность и механизмы гормональной регуляции продукции оксида азота эндотелием артерий у крыс в раннем постнатальном онтогенезе

• Автор: Софронова, Светлана Ивановна
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 142 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Общая характеристика NO-пути в сосудах

1.1.1 Синтез и механизм действия оксида азота

1.1.2 Строение и принцип работы эндотелиальной NO-синтазы

1.1.3 Регуляция работы eNOS

1.1.3.1 Регуляция на транскрипционном и посттранскрипционном уровнях

1.1.3.2 Другие механизмы долговременной регуляции eNOS

1.1.3.3 Механизмы кратковременной регуляции активности eNOS
1.2 Регуляция активности eNOS половыми гормонами
1.2.1 Локальный синтез и рецепторы эстрогенов в сосудистой системе
1.2.2 Влияние эстрогенов на экспрессию eNOS
1.2.3 Влияние эстрогенов на активность eNOS
1.3 Регуляция активности eNOS тиреоидными гормонами
1.3.1 Синтез тиреоидных гормонов и их рецепторы
1.3.2 Влияние тиреоидных гормонов на активность и экспрессию eNOS в эндотелии сосудов
1.3.3 Взаимосвязь регуляторных влияний половых и тиреоидных гормонов
1.4 Изменения активности NO-пути в раннем постнатальном онтогенезе
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Экспериментальные животные
2.1.1 Общая характеристика экспериментальных групп
2.1.2 Хроническая блокада эстрогеновых рецепторов типа а/(3 и ароматазы в
раннем постнатальном периоде
2.1.2.1 Характеристика препаратов
2.1.2.2 Протокол введения
2.1.3 Модель антенатального гипотиреоза
2.1.3.1 Характеристика препарата
2.1.3.2 Протокол введения
2.2 Эксперименты in vivo

2.2.1 Изготовление катетеров
2.2.2 Вживление катетеров
2.2.3 Установка для измерения артериального давления
2.2.4 Исследование реакций на метоксамин и Ь-ТМАМЕ
2.2.5 Обработка результатов
2.3 Определение показателей крови
2.3.1 Получение сыворотки крови
2.3.2 Определение содержания гормонов методом иммуноферментного анализа
2.3.3 Протокол измерения содержания метаболитов N0 в образцах сыворотки
крови
2.4 Эксперименты на изолированных сосудах
2.4.1 Объекты исследования
2.4.2 Исследование сокращения в изометрическом режиме
2.4.2.1 Нормализация (определение оптимального растяжения сосуда)
2.4.2.2 Активация препарата
2.4.2.3 Фармакологические агенты, использовавшиеся в экспериментах на
изолированных сосудах
2.4.2.4 Протоколы экспериментов
2.4.2.4.1 Протокол экспериментов по исследованию блокады продукции оксида
азота в эндотелии
2.4.2.4.2 Протокол экспериментов по исследованию чувствительности гладкой
мышцы артерий к донору оксида азота
2.4.2.4.3 Обработка результатов
2.5 Исследование уровня экспрессии мРНК методом полимеразной цепной реакции
2.5.1 Приготовление образцов мРНК
2.5.2 Синтез комплементарной ДНК
2.5.3 Количественная ПЦР или ПЦР в реальном времени
2.5.4 Обработка результатов количественной ПЦР
2.6 Статистическая обработка результатов
3 РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1 Исследование активности МО-пути у 2-недельных и взрослых крыс на системном уровне
3.1.1 Изменения параметров системной гемодинамики после блокады >ГО-синтазы
3.1.2 Содержание продуктов метаболизма N0 в крови
3.2 Исследование активности МО-пути в резистивных артериях различных органов у крыс разного возраста
3.2.1 Изменение диаметра и сократимости артерий с возрастом
3.2.2 Влияние блокады продукции N0 на сократительные ответы артерий брыжейки
3.2.3 Влияние блокады продукции N0 на сократительные ответы подкожной артерии
3.2.4 Влияние блокады продукции N0 на сократительные ответы артерии икроножной мышцы
3.2.5 Влияние блокады продукции N0 на сократительные ответы артерий почки .
3.2.6 Чувствительность гладкой мышцы артерий различных органов к N0
3.2.7 Уровни экспрессии мРНК еЫ08 и аргиназы-2 в артериях различных органов
3.2.8 Заключение по результатам исследования активности МО-пути в артериях
крыс разного возраста
3.3 Исследование влияния эстрогенов на МО-зависимую регуляцию тонуса артерий в раннем постнатальном онтогенезе
3.3.1 Сравнительный анализ состояния эстрогеновой системы у 2-недельных и взрослых крыс
3.3.1.1 Содержание половых гормонов в сыворотке крови 2-недельных и взрослых крыс
3.3.1.2 Уровни экспрессии мРНК а-типа эстрогеновых рецепторов в артериях
3.3.2 Исследование эффектов хронической блокады эстрогеновых рецепторов типа а/(3 на активность МО-пути в артериях 2-недельных крыс
3.3.2.1 Влияние блокады ЕЯа/р на реакции подкожной артерии
3.3.2.2 Влияние блокады ЕИя/р на реакции артерий брыжейки

После рождения наиболее кардинальные изменения происходят в легочном кровообращении. У плода легкие не функционируют и почти не снабжаются кровью, то есть сопротивление сосудов в малом круге кровообращения очень велико. Сразу после рождения происходит падение сосудистого сопротивления и, как результат, увеличение легочного кровотока более чем в 6 раз. Затем сопротивление легочных сосудов плавно снижается еще в течение нескольких недель, что сопряжено с интенсивным ветвлением легочных артерий. Важную роль в этих перестройках играет оксид азота [Aschner et al., 2009].
Было показано, что эндотелий-зависимая дилятация внутрилегочных артерий у новорожденных и у взрослых крыс выше, чем у плодов [Kawai et al., 1995]. При этом мРНК eNOS начинала выявляться в позднем пренатальном периоде, уровень ее экспрессии достигал максимума в первые дни постнатальной жизни и снижался при взрослении, начиная с 26-го дня [Kawai et al., 1995]. Наряду с этим активность и экспрессия аргиназы в легочных артериях плодов были значительно выше, чем в у новорожденных и взрослых крыс, а ингибирование аргиназы приводило к большему снижению артериального тонуса у плодов и новорожденных крыс по сравнению со взрослыми, по всей вероятности, в результате повышения продукции N0 в эндотелии. Таким образом, повышенная активность аргиназы в фетальном периоде обеспечивает поддержание высокого сопротивления легочных сосудов [Belik et al., 2008]. Снижение сопротивления легочного русла после рождения связано с NO-зависимой регуляцией тонуса легочных сосудов, которая увеличивается, как за счет усиления продукции N0 в эндотелии, так и за счет повышения чувствительности гладкой мышцы к NO [Boegehold, 2010].
В головном мозге эндотелий-зависимая регуляция тонуса сосудов также претерпевает возрастные изменения: как и в легких, происходит повышение регуляторной роли NO. Например, в артериях мозга свиней в раннем постнатальном онтогенезе главными дилятаторными агентами являются простаноиды, а к возрасту 3-4 месяцев происходит возрастание вклада N0 в эндотелий-зависимое расслабление [Boegehold, 2010]. Такие функциональные изменения связаны с двух-трех-кратным повышением активности и экспрессии eNOS [Parfenova et al., 2000]. Сходные изменения характерны и для мышей, у которых в возрасте одной недели влияние N0 на тонус артерий мозга практически