Оценка влияния низкомолекулярных белков костной ткани различных видов млекопитающих на динамику сращения перелома трубчатой кости

• Автор: Мельников, Сергей Александрович
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Курган
• Количество страниц: 118 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л Строение и структура костной ткани

1.2 Состав костного матрикса

1.3 Регуляторные белки костной ткани

1.5 Применение регуляторных белков костной ткани в ортопедии

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы исследования

2.2 Методы исследования

2.2.1 Способ получения низкомолекулярных белков костной ткани млекопитающих животных
2.2.2 Хроматографические методы исследования белков костной
ткани
2.2.3 Способ моделирования перелома голени у лабораторных
мышей
2.2.4 Методы исследования сыворотки крови экспериментальных животных
2.2.5 Методы исследования костной ткани экспериментальных животных
2.2.6 Метод оценки содержания гликогена в печени и мышечной
ткани экспериментальных животных
2.2.7 Статистические методы исследования
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1 Экспериментальный анализ условий проведения
гель-проникающей хроматографии
3.2 Хроматографическое исследование кислоторастворимых низкомолекулярных белков костной ткани млекопитающих животных

3.2.1 Исследование состава препаратов кислоторастворимых низкомолекулярных белков костной ткани собаки, быка свиньи и кролика с помощью гель-проникающей хроматографии
3.2.2 Исследование состава препаратов кислоторастворимых низкомолекулярных белков костной ткани собаки, быка свиньи и кролика с помощью ионообменной хроматографии
3.3 Сравнение биологического действия фракций препаратов кислоторастворимых низкомолекулярных белков костной ткани свиньи и быка, обладающих сродством к катионообменнику
3.4 Изучение биологического действия фракций препарата кислоторастворимых низкомолекулярных белков костной ткани

3.4.1 Получение фракций с рассчитанной молекулярной массой 6,5 и
1,3 кДа из препарата кислоторастворимых низкомолекулярных белков костной ткани быка
3.4.2 Исследование биологического действия фракции белков
костной ткани быка с рассчитанной молекулярной массой 6,5 кДа
3.4.3 Исследование биологического действия фракции белков
костной ткани быка с рассчитанной молекулярной массой 1,3 кДа
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Список использованных сокращений
ГМ-КСФ - гранулоцитарный-макрофагальный колонийстимулирующий фактор
ИЛ - интерлейкин
ИПФР - инсулиноподобный фактор роста КМБ - костный морфогенетический белок
КНБКТ — кислоторастворимые низкомолекулярные белки костной ткани ТрКФ - тартрат-резистентная кислая фосфатаза ЛДГ - лактатдегидрогеназа
МЕРЕ - фосфогликопротеин внеклеточного матрикса
МКСФ - макрофагальный колонийстимулирующий фактор
Мг — относительная молекулярная масса
ОБ - общий белок
ОП — остеопонтин
ПГЕ - простагландин Е
ПГТ — простагландин Б
РНК - рибонуклеиновая кислота
ТФР - трансформирующий фактор роста
ФНО - фактор некроза опухоли
ФРТ - фактор роста тромбоцитов
ФРФ - фактор роста фибробластов
ЩФ - щелочная фосфомоноэстераза
ЭФР — эпидермальный фактор роста

хроматографии и ІЕС БР-2825 для катионообменной хроматографии. В качестве элюента использовали буферный раствор
трис(гидроксиметил)аминометан - соляная кислота (Трис-НС1) концентрацией 100 ммоль/л и pH = 7,5. Для ионообменной хроматографии был использован фосфатный буфер концентрацией 20 ммоль/л. Буфер для катионообменной хроматографии имел pH = 6,8. Линейный градиент концентрации элюирующего раствора создавали использованием 0,00 - 1 М хлористого натрия в 20 мМ фосфатном буфере с соответствующим pH. В качестве калибровочных растворов для гель-проникающей хроматографии использовали набор маркеров молекулярной массы Signla-Aldrich (США) МЛУОБ 200-1КТ. Закалываемый объем пробы не превышал 1 мл, а концентрация белковых препаратов 40 мг/мл. Скорость потока для гель-проникающей хроматографии - 2 мл/мин, для ионообменной - 3 - 5 мл/мин.
2.2.3 Способ моделирования перелома голени у лабораторных мышей
Перелом верхней трети голени осуществляли путем механического повреждения сегмента конечности в верхней трети с медиальной поверхности под диэтиловым наркозом. В соответствии с Патентом РФ № 2456927 от 27 июля 2012 года предварительно наркотизированное животное укладывали на приборном столе на животе. Далее фиксировали голень медиальной стороной на краю приборного стола, находили точку перелома кости в верхней трети голени и затем проводили перелом костей голени путем механического воздействия, перпендикулярно прикладываемого на продольную ось большеберцовой кости, до появления характерного звука перелома, при наличии которого судят об осуществлении перелома. Отсутствие смещения отломков отмечают визуально по сохраненной после манипуляции продольной оси голени.