Локализация и функциональная роль белка CD97 в скелетных мышцах

• Автор: Зырянова, Татьяна Юрьевна
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 116 с. : ил.

Содержание

Список сокращений

Введение

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Фенотип скелетных мышечных волокон

1.2. Влияние различных белковых факторов на фенотип скелетных мышечных волокон

1.3. Молекулярное строение и функциональная активность CD

1.4. Молекулярные механизмы сокращения и расслабления скелетных мышц

1.5. Изучение молекулярных механизмов регуляции фенотипа скелетных мышечных волокон у млекопитающих, страдающих различными видами миопатий

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Локализация и интенсивность экспрессии CD97 в быстрых и медленных волокнах т. spinalis и т. vastus medialis человека
3.1.1. Локализация CD97 в быстрых и медленных волокнах т. spinalis
и т. vastus medialis человека
3.1.2. Сравнительный анализ интенсивности экспрессии CD97 в
быстрых и медленных волокнах т. spinalis и т. vastus medialis человека
3.2. Динамика концентрации ионов кальция в миоплазме изолированных интактных одиночных поперечнополосатых мышечных волокнах т. flexor digitorum brevis мышей дикого типа и нокаутных по CD97 при воздействии кофеина и хлорида калия
3.3. Критерии фенотипа скелетных мышечных волокон т. soleus и

m. extensor digitorum longus у мышей дикого и нокаутных по CD
3.3.1. Анатомические и гистологические критерии скелетных мышц
т. soleus и т. extensor digitorum longus мышей дикого типа и нокаутных по CD
3.3.2. Распределение волокон в соответствии с активностью ферментов окислительного и гликолитического типов обмена, миофибриллярной аденозинтрифосфатазы в т. soleus и т. extensor digitorum longus у мышей
дикого и нокаутных по CD
4. ОБСУЖДЕНИЕ
Заключение
Выводы
Список использованных источников

Список сокращений АТФаза - аденозинтрифосфатаза
BAI - рецепторный белок, специфический ингибитор ангиогенеза мозга
CV - коэффициент вариации
DHPR - дигидропиридиновые рецепторы
ETL - латрофилин
Fura-2, AM - ратиометрический кальций чувствительный зонд
m. EDL - ш. extensor digitorum longus
m. FDB - m. flexor digitorum brevis
MG29 - митсугунин
МНС - тяжелая цепь миозина
RyR - рианодиновый рецептор
а - ГФДГ - а —глицерофосфатдегидрогеназы
ИФР - инсулиноподобный фактора роста
МЕМ - среда для поддержания культуры клеток
мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота
НСТ - нитросиний тетразолий
Са-АТФаза - аденозинтрифосфатаза - кальцевая аденозинтрифосфатаза
СДГ - сукцинатдегрогеназа
СР - саркоплазматический ретикулюм
у.е. - условная единица измерения
ЭПР - эндоплазматический ретикулюм
ЭФР - эпидермальный фактор роста

Определение локализации и степени экспрессии белка в скелетных мышечных волокнах человека. Локализацию CD97 в быстрых и медленных волокнах определяли с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания. Для получения более достоверных данных интенсивность экспрессии CD97 в быстрых и медленных волокнах определяли параллельно с помощью иммуногистохимического и иммунофлуоресцентного окрашивания. Иммуногистохимический анализ использовали, как качественный подход, иммунофлуоресцентный - как количественный.
Степень экспрессии белка определяли с помощью визуального анализа интенсивности флюоресценции после получения серии фотографий. Все фотографии были сделаны в сходных условиях без изменения технических параметров установки и программного обеспечения. На последовательных окрашенных разными антителами срезах мышечной ткани человека выбирали одинаковый участок образца для анализа при равном увеличении микроскопа во всех случаях. На каждом участке образца было проанализировано в среднем 60 волокон. На каждом срезе от каждого пациента выбирали 3 участка для анализа. Таким образом, всего было проанализировано 1267 волокон от 6 пациентов.
Иммуногистохимическое окрашивание поперечных срезов скелетных мышц человека и мышей проводили по описанной ранее методике (Veninga et al., 2008). Замороженные срезы (6 мкм) фиксировали (10 мин, 20-25 °С) в охлажденном ацетоне (Aldrich, Германия). Для уменьшения внутренней активности пероксидазы на образцы наносили (30 мин, 22 °С) 0,03 % Н2С>2 (Sigma, Германия). Для блокирования неспецифического связывания используемых антител с другими антигенами на срезы ткани наносили (60 мин, 22 °С) 2,5 % сыворотку лошади (ImmPRESS Detection system, США).
Для визуализации окраски срезов ткани использовали 3,3-диаминобензидин (ДАБ) (Vector Laboratories, США), являющийся субстратом для пероксидазы. Для окраски ядер клеток использовали гематоксилин согласно стандартной методике (Меркулов, 1969).