Влияние психотропного препарата ТС-2153 на поведение и экспрессию генов серотониновой системы и нейротрофического фактора мозга мышей, генетически предрасположенных к нейропатологии

• Автор: Куликова, Елизавета Александровна
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 82 с. : ил.

Список используемых сокращений

Введение
Глава 1. Обзор литературы. Участие серотониновой системы и иейротрофического фактора мозга в механизме депрессии. Экспериментальные модели психопатологии

1.1. Депрессия

1.2.Экспериментальные модели депрессии

1.3.Участие серотониновой системы головного мозга в механизмах возникновения депрессии и действии антидепрессантов
1.4.Участие иейротрофического фактора мозга ВЭ№ в механизмах возникновения депрессии и действии антидепрессантов

1.5.Объединение гипотез

1 .б.Бензопентатиспины

Глава 2. Материалы и методы

2.1 .Экспериментальные животные
2.2.11репараты
2.3.Экспериментальные серии
2.4.Поведенческие тесты
2.5.Магнитно-резонансная томография
2.6. Определение уровня экспрессии генов
2.7. Статистическая обработка
Глава 3. Результаты
3.1. Морфологические особенности мозга мышей, генетически предрасположенных к патологическому поведению
3.2. Влияние ТС-2153 на поведение
3.2.1. Каталепсия
3.2.2. Депрессивноподобное поведение
3.2.3. Двигательная активность, исследовательская активность и тревожность
3.2.4. Сравнение поведенческих эффектов препарата ТС-2153 и классических антидепрессантов, ингибиторов обратного захвата серотонина, флуоксстина и имипрамина
3.3 .Исследование механизма действия ТС-2
3.3.1. Участие серотониновой системы в механизме действия препарата ТС-2
3.3.2. Влияние 'ГС-2153 на экспрессию гена нейротрофического фактора мозга ВО!4-!? и гена транскрипционного фактора СЯЕЕЗ
Глава 4. Обсуждение
Заключение
Выводы
Список цитируемой литературы

Список используемых сокращений
5-НТ (5-hydroxytryptamine) — 5-гидрокситриптамин/ серотонин 5-НТ|.7 - рецепторы серотонина
8-OH-DPAT - 8-гидрокси-М,1М-дипропил-2-аминотетралин ГК - линия крыс (Генетические Каталептики)
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ДНК - диэтилпирокарбонат
МАОА; Маоа - моноаминоксидаза А; ген, кодирующий фермент МАОА мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота ОП - тест «открытое поле»
ОТ-ПЦР - обратная транскрипция - полимеразная цепная реакция ПКЛ - тест «приподнятый крестообразный лабиринт»
ПП - тест «принудительное плавание»
ТВИН-80 — полисорбат
ТПГ-2; 7р/?-2-триптофангидроксилаза2; ген, кодирующий фермент ТПГ-
цАМФ - циклический адснозинмонофосфат
ASC - линия мышей (Antidepressant Sensitive Catalepsy)
BDNF-brain-derived neurotrophic factor-пейротрофический фактор мозга
CRE - последовательность на молекуле ДНК, связывающаяся с белком CREB
CREB - cAMP-responsive element binding protein - цАМФ-зависимый транскрипционный
фактор
D2 - рецептор дофамина второго типа
ДМСО - диметилсульфоксид, биполярный апротопный растворитель FSL - линия крыс (Flinders Sensitive Line)
HL-линия мышей (Helpless mice)
lllrla - ген 5-НТ|д рецептора
M76C -линия мышей (AKR.CBA-D13Mit76)
MSME-(Multi Slice Multi Spin Echo) метод спинового эха многосрезового сканирования RARE-(rapid acquisition with relaxation enhancement) метод турбо-спинового эха Slc6a4 - ген белка транспортера серотонина
ТС-2153 - 8-(трифтормстил)-1,2,3,4,5-бснзопентатиепин-6-амин гидрохлорид TrkB - tropomyosin-related kinase В - киназа В, родственная тропомиозину

DNAase. Пробы инкубировали при 37°С в течение 15 мин, а затем - 10 мин при 65°С для разрушения ДНКазы.
Аликвоту 5 мкл раствора РНК разводили до 100 мкл дистиллированной водой и измеряли концентрацию РНК на спектрофотометре Эппендорф BioPhotometer plus. Чистоту определяли по соотношению оптических плотностей образца, измеренных при 260 и 280 им. Образцы РНК разводили до концентрации 150 мкг/мл водой, обработанной ДПК, и хранили при -65с’С.
Отсутствие примесей геномной ДНК в общей РНК препаратов определяли с помощью ПЦР реакции с праймером ß, связывающимся специфично с генами Actal, Lrrc 58, Actb (Табл.1). Препараты РНК не давали сигналов геномной ДНК при 36 циклах амплификации. ОТ-ПЦР
Количественную оценку уровня экспрессии мРПК генов Ihrla, Tph2, Slc6a4, Маоа, Bdnf и Crebl проводили по отношению к экспрессии «гена домашнего хозяйства» — РНК-полимеразы 2 (Polr2a), который служил внутренним стандартом обратной транскрипции. В качестве внешнего стандарта для определения числа копий мРНК соответствующих генов использовали ДНК мыши известной концентрации (Науменко, Куликов, 2006b).
В работе использовали амплификаторы - Mastercycler personal и «БИС».
Реактивы:
1. Обратная транскриптаза M-MulV - 500 е.а./мкл (“Биосан”, Новосибирск, Россия);
2. Taq-полимераза - 5 е.а./мкл (“Сибэнзим”, Новосибирск, Россия);
3. Набор dNTP (dATP, dCTP, dGTP и dTTP) - ЮОмМ (“Сибэнзим”, Новосибирск,
Россия), готовили смесь, содержащую по 4 мМ каждого трифосфата;
4. Буфер для Taq-полимеразы ПЦРхЮ (KCl - 0.5М (“Sigma”, США); Трис-НС1 (“Sigma”. США) (рН=9) - 0.1 М; TritonX-100 (“Sigma”, США) - 1 %);
5. Рандомпый шести нуклеотидный праймер 100 o.e./мл ("Биосан”, Новосибирск, Россия);
6. Смесь прямого и обратного праймеров для исследуемых генов (Табл.1) с концентрацией по 4 нмоль/мл каждого;
7. Трис IICI ("Sigma”, США) (pH 8,1)- IM;
8. Дитиотреитол (ДТТ; “Sigma”, США) -0.IM;
9. МпСЬ (“Sigma”, США) - 0.1 М;
10. Стерильный раствор КС1 (“Sigma”, США)- IM;
11. Вода Milli-Q, обработанная ДПК (ДПК; “Sigma”, США; 1 мл/л) и затем