Влияние острого стресса и липополисахарида на серотониновую систему мозга и поведение мышей, различающихся по предрасположенности к наследственной каталепсии

• Автор: Баженова, Екатерина Юрьевна
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 82 с. : ил.

Список используемых сокращений

Введение
Глава 1. Обзор литературы. Взаимодействие 5-НТ системы мозга, ГГНС и иммунной системы в регуляции поведения

1.1. Анатомия и биохимия 5-НТ системы мозга

1.2. Взаимодействие между 5-НТ системой мозга и ГГНС

1.3. Взаимодействие между 5-НТсистемой мозга и иммунной системой

1.4. Участие 5-НТ системы мозга в регуляции полового поведения и каталепсии

1.5. Наследственная каталепсия у мышей, как модель взаимодействия 5-НТ системы

мозга, ГГНС и иммунной системы

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Животные и воздействия

2.2. Тест «перегородка»
2.3. Тест на каталепсию
2.4. Определение уровня кортикостерона
2.5. Выделение РНК и ОТ-ПЦР
2.6. Определение уровней 5-НТ и 5-ГИУК в мозге
2.7. Статистическая обработка
Глава 3. Результаты
3.1. Влияние острого эмоционального стресса на половое мотивационное поведение, выраженность каталепсии, уровень кортикостерона, экспрессию гена с-Гоэ, и метаболизм 5-НТ в мозге у мышей, различающихся по предрасположенности к наследственной каталепсии
3.1.1. Сравнение действия острого эмоционального стресса на выраженность полового мотивационного поведения у самцов мышей конгенной линии Б13 и родительских линий АКИ и СВА
3.1.2. Сравнение действия острого эмоционального стресса на выраженность каталепсии у мышей конгенной линии Б13 и родительских линий АКЯ и СВА
3.1.3. Сравнение действия острого эмоционального стресса на уровень кортикостерона в плазме крови у мышей конгенной линии Б13 и родительских линий ЛКЙ. и СВА
3.1.4. Сравнение действия острого эмоционального стресса на уровень экспрессии гена с-Роя в мозге у мышей конгенной линии ШЗ и родительской линии АКК
3.1.5. Сравнение действия острого эмоционального стресса на метаболизм 5-НТ в мозге у мышей конгенной линии Б13 и родительских линий АКК и СВА

3.2. Эффекты ЛПС на выраженность каталепсии и метаболизм 5-НТ в мозге у мышей, различающихся по предрасположенности к наследственной каталепсии
3.2.1. Сравнение эффектов ЛПС на выраженность каталепсии у мышей конгенной линии Б13 и родительских линий АКЛ и СВ А
3.2.2. Сравнение эффектов ЛПС на метаболизм 5-НТ в мозге у мышей конгенной линии
Б13 и родительских линий АКЯ и СВА
Глава 4. Обсуждение результатов
Выводы
Список цитируемой литературы

Список используемых сокращений
5-НТ (5-hydroxytryptamine) - 5-гидрокситриптамин/ серотонин 5-ГИУК - 5-гидроксииндолуксусная кислота
CNTF (ciliary neurotropic factor) - мерцательный нейротропный фактор
ERK (extracellular signal-related kinase) - киназа, регулируемая внеклеточным сигналом
GDF (growth differentiating factor) - ростовой фактор дифференциации
gp 130 (glycoprotein 130) - гликопротеин
Hsp (heat-shock protein) - белок теплового шока
116st (interleukin-6 signal transducer) - сигнальный трансдуктор интерлейкина-6 IL-6 (Interleukin-6) - интерлейкин
iNOS (inducible nitric oxide synthase) - индуцибильная синтаза оксида азота LIF (leukaemia inhibitory factor) - фактор ингибирования лейкемии МАРК (mitogen-activated protein kinase) - митоген-активируемая киназа OSM (oncostatin M) - онкостатин M
QTL (Quantative trait locus) - локус количественных признаков
STAT (signal transducer and activator of transcription) - передатчик внутриклеточного
сигнала и активатор транскрипции
TNF (tumor necrosis factor) - фактор некроза опухоли
АКТГ - адренокортикотропиый гормон
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография
ГГНС - гипоталамо-гипофизарио-надпочечниковая система
ГР - глюкокортикоидные рецепторы
ИДО - индоламин-2,3-диоксигеназа
ИФА- иммуноферментный анализ
КРГ - кортикотропин-рилизинг-гормон
ЛПС- липополисахарад
МАО А - моноаминоксидазой А
МР - минералокортикоидные рецепторы
п.н. - пар нуклеотидный остаток
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ТПГ- триптофангидроксилаза

Corticosterone Enzyme Immunoassay Kit (Assay Designs Inc., USA) согласно инструкции производителя.
2.5. Выделение РНК и ОТ-ПЦР
Выделение общей РНК проводили экстракцией смесью гуанидина тиоционата, фенола и хлороформа и растворяли в 44 мкл обработанной диэтилпирокарбонатом воды. Примеси геномной ДНК удаляли обработкой ДНКазой (5 мкл 10х буфера, Promega, USA и 1 мкл ДНКазы, Promega, USA, 15 мин 37°С, затем 10 мин 60°С). РНК, свободную от ДНК, экстрагировали смесью гуанидина тиоционата, фенола и хлороформа и растворяли в 40 мкл обработанной диэтилпирокарбонатом воды, определяли оптическую плотность, разводили обработанной диэтилпирокарбонатом водой до концентрации 0,125 мкг/мкл и хранили при -70°С. Наличие примеси геномной ДНК в общей РНК определяли с помощью ПЦР с праймерами для ß-актина. F 5'- CGGAACCGCTCATTGCC, R 5 — ACCCACACTGTGCCCATCTA, температура отжига - 61°С и размер ампликона 285 п.н..
Концентрацию мРНК генов определяли методом количественного ПЦР (Kulikov et al., 2005; Науменко, Куликов, 2006). В качестве внешнего стандарта брали известные концентрации геномной ДНК мыши (линия C57BL/6J). В нашей работе мы использовали стандарты с концентрациями 64 нг/мкл (12800 копий/мкл) и 128 нг/мкл (25600 копий/мкл). Отрицательным контролем служила ПЦР смесь без добавления аликвоты кДНК. В качестве внутреннего стандарта использовали концентрацию кДНК РНК-полимеразы 2 в пробе. Конечный состав ПЦР-смеси содержал 10х буфер, 0,2мМ dNTP, 0,5мМ смесь прямого и обратного праймеров, 1,5мМ Mg2+, 0,25 ед. Taq полимеразы и стерильной воды до 20 мкл. К реакционной смеси добавляли 1 мкл кДНК или стандарта ДНК. Протокол ПЦР, был следующим: 94°С - 2 мин.; (94°С - 15 с, ТОТЖига0С - 30 с, 72°С -15 с) 25-30 циклов; 72°С - 2 мин. Оптимальное число циклов ПЦР подбирали, строя кривую зависимости количества амплифицированпых фрагментов от количества циклов (25-30 циклы), выбирая в качестве оптимального цикл из середины линейного участка кривой. Аналогичным образом подбирали оптимальную концентрацию ДНК-стандартов на выбранном цикле. Уровень мРНК гена c-Fos выражали числом копий на 100 копий мРНК РНК-полимеразы 2. Нуклеотидная последовательности праймеров для c-Fos F 5’-ААА GAG AAG GAA AAA CTG GAG, R 5’- CGG AAA CAA GAA GTC АТС AA, температура отжига - 58°C и размер ампликона 264 п.н., а последовательности праймеров для мРНК полимеразы 2 F 5’- GTT GTC GGG CAG AAT GTA G, R 5'- TCA ATG AGA CCT TCT CGT CCT CC, температура отжига - 63°C и размер ампликона 188 п.н. Продукты ПЦР исследуемых образцов, стандартов и отрицательного контроля были разделены при