Флавоноиды растений Fagopyrum sagittatum Gilib. (гречихи посевной) и Serratula coronata L. (серпухи венценосной) : методы выделения, идентификация веществ, перспективы использования

• Автор: Мягчилов, Алексей Викторович
• Шифр специальности: 03.02.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 153 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1 Обзор литературы

1.1 Рациональное использование отходов зернового производства

1.2 Биологически активные вещества гречихи

1.3 Биологически активные вещества серпухи венценосной

1.4 Методы выделения и идентификации флавоноидов растений

2 Экспериментальная часть

2.1 Объекты исследования

2.1.1 Тфъчт&'посеъп.ъя,-Fagopynim sagittatumGl\h. 46М

2.1.2 Серпуха венценосная - Бепаініа согопаіа Ь.бЛ
2.2 Аппаратура и условия анализа
2.3 Очистка растворителей и приготовление растворов
2.3.1 Реактивы
2.3.2 Очистка растворителей и приготовление диагностических растворов
2.3.3 Приготовление стандартных растворов (рутина, лготеолина, ориентина и
кверцетина) и построение градуированных графиков
2.3.4 Приготовление рабочих растворов (витексина, 3-метилкверцетина, апигенина и изокемпферида), выделенных из исследуемого растительного сырья
2.3.5 Приготовление рабочего раствора ситостеролина
2.4 Определение влажности образцов растительного сырья
2.5 Выбор оптимальных условий выделения флавоноидов из исходных растительных объектов
2.6 Количественное определение суммы флавоноидов в полученных экстрактов
2.7 Статистическая обработка данных
2.8 Приготовление и разделение экстрактов флавоноидов
2.8.1 Приготовление экстракта шелухи гречихи посевной
2.8.2 Приготовление экстракта соцветий серпухи венценосной
2.8.3 Приготовление экстракта стеблей серпухи венценосной

2.8.4 Приготовление экстракта листьев серпухи венценосной
2.9 Идентификация флавоноидов и ситостеролина
2.10 Идентификация флавоноидов методом обращенно-фазовой ВЭЖХ
2.11 Количественное определение флавоноидов методом обращенно-фазовой ВЭЖХ
3 Обсуждение результатов
3.1 Выбор оптимальных условий выделения флавоноидов из исходных растительных объектов
3.2 Очистка экстрактов и разделение смеси флавоноидов
3.3 Ситостеролин и флавоноиды из гречихи посевной
3.3.1 Идентификация фитостерола р-ситостерол-3-0-(3-0-глюкопиранозида
(ситостеролина)
3.3.2 Идентификация флавоноида апигенин-3-0-(3-1>-глюкопиранозида (витексина)
3.3.3 Разделение и идентификация флавоноидов из шелухи гречихи посевной методом обращенно - фазовой ВЭЖХ
3.3.4 Определение ситостеролина в шелухе и траве гречихи посевной методом обращенно-фазовой ВЭЖХ
3.4 Флавоноиды серпухи венценосной
3.4.1 Идентификация флавоноида 5,7,4-трищдрокси-3-метоксифлавона (изокемпферида)
3.4.2 Идентификация флавоноида 5,7,4'- тригидроксифлавона (апигенина)

3.4.3 Идентификация флавоноида 5,7,3',4'-тригидрокси-3-метоксифлавона (3-метилкверцетина)
3.4.4 Разделение и идентификация флавоноидов, выделенных из надземной части серпухи венценосной методом обращенно-фазовой ВЭЖХ
ВЫВОДЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПриложениеБ1 Градуировочный график для определения суммы флавоноидов 128 Приложение Б 2 Градуировочный график стандартного раствора рутина 129 Приложение Б 3 Градуировочный график стандартного раствора витексина 130 Приложение Б 4 Градуировочный график стандартного раствора ориентина 131 Приложение Б 5 Г радуировочный график стандартного раствора кверцетина 132 Приложение Б 6 Градуировочный график стандартного раствора лютеолина 133 Приложение Б7 Градуировочный график стандартного раствора 3-метилкверцетина
Приложение Б 8 Градуировочный график стандартного раствора апигенина
Приложение Б9 Градуировочный график стандартного раствора изокемпферида
Приложение Б 10 Хроматограмма стандарта ориентина
Приложение Б 11 Хроматограмма витексина
Приложение Б 12 Хроматограмма стандарта рутина
Приложение Б 13 Хроматограмма ориентина
Приложение Б 14 Хроматограмма стандарта лютеолина
Приложение Б 15 Хроматограмма 3 - метилкверцетина 142 •
Приложение Б 16 Хроматограмма апигенина
Приложение Б 17 Хроматограмма изокемпферида 144 ■
Приложение Б 18 ИК-спектр соединения р-ситостерол-3-0-|3-Е)-глюкопиранозвда (ситостеролина)
Приложение Б 19 Масс-спектр ситостеролина
Приложение Б 20 УФ-спектр соединения витексина
Приложение Б 21 ИК-спектр соединения витексина
Приложение Б 22 Масс -спектр витексина
Приложение Б 23 УФ-спектр изокемпферида
Приложение Б 24 Масс-спектры флавоноидов выделенных из надземной части растения-5етг/н/а согопа1а Ь.бЛ.
Приложение Б 25 УФ-спектр апигенина
Приложение Б 26 УФ — спектр 3 - метилкверцетина

Препаративную ТСХ применяют чаще всего для доочистки индивидуальных соединений или разделения фракций, содержащих небольшое количество соединений [Юй, 2006]. При анализе флавоноидных соединений методом ТСХ флавоноиды идентифицируют по характеру свечения на хроматограммах в УФ-свете и после проявления хромогенными растворами.
Для проявления флавоноидов на хроматограммах используют пары 25%-ного аммиака либо 2-5 % -ный спиртовый раствор хлорида алюминия. При этом происходит усиление окраски пятен в УФ свете или изменение окраски до желтой, в случае использования хлорида алюминия [Гришина, Погодин, Лукша, 2008].
Катехины проявляют 1 %-ным раствором ванилина в концентрированной соляной кислоте, при этом в видимом диапазоне наблюдается интенсивное красное окрашивание [Гришина, Погодин, Лукша, 2008].
Кроме ТСХ при анализе экстрактов, состоящих из смеси флавоноидов, используется бумажная хроматография (БХ), которая ранее являлась одним из самых применяемых методов в анализе флавоноидных соединений [Георгиевский, Комиссаренко, Дмитрук, 1990]. В БХ применяют растворители, обладающие высокой кислотностью. Это обусловлено тем, что флавоноидные соединения обладают свойствами слабых кислот и кислотность растворителя способствует уменьшению диссоциации флавоноидов. В БХ чаще всего для разделения флавоноидов используют систему бутанол - уксусная кислота - вода (БУВ). При разделении флавоноидов выделенных из видов Myosotis arvensis, М. krylovii, М. austrobaicalensis, М. decumbens, М. pseudovariabilis, М. baicalensis, М. palustris, М. asiatica [Шинкаренко, 2008], Astragalus membranaceus [Коцупий, 2007] использовали систему бутанол-уксусная кислота-вода (БУВ) (40:12:28); видов Serratula coronata [Ангаскиева, 2006], Astragalus onobrychis [Гужва, 2009], Arctostaphylos uva-ursi, Vaccinium vitis-idaea, Vaccinium myrtillus, Vaccinium uliginosum [Исследование качественного...., 2009] (4:1:2); вида - Aslchemilla
valgaris (10:3:7) [Андреева, Калинкина, 2000].
В анализе флавоноидов широкое распространение получил метод газо-