Особенности биологической активности эндофитных штаммов Bacillus Subtilis Cohn с различной степенью антагонизма к фитопатогенным грибам

• Автор: Лукьянцев, Михаил Александрович
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 134 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

Сокращения и условные обозначения

Введение

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Краткая характеристика эндофитных бактерий

1.2. Представители рода Bacillus как потенциальные стимуляторы

роста растений

1.3. Явление бактериального антагонизма и его общие механизмы

1.4. Бактериальные антибиотики

1.4.1. Антибиотики, продуцируемые В. subtilis
1.5. Внеклеточные гидролитические ферменты бактерий Bacillus
1.6. Другие способы антагонистического воздействия почвенных
бактерий на фитопатогенную микрофлору
Глава 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬАЯ ЧАСТЬ
2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1.1. Объект исследований и питательные среды
2.1.2. Методы оценки культурально-морфологических и физиологобиохимических признаков штамма В. subtilis 49PIT
2.1.3. Определение антагонистической активности штаммов
В. subtilis in vitro
2.1.4. Получение и анализ антибиотиков штаммов В. subtilis
2.1.5. Определение активности внеклеточных гидролаз
2.1.6. Оценка биологической активности штаммов бактерий по отношению к растениям
2.1.6. Выявление характера взаимоотношений исследуемых штаммов
с другими видами бактерий
2.1.7. Анализ антагонистической активности штаммов В. sublilis к

микромицетам в почве
2.1.8. Оценка жизнеспособности штаммов В. ьиЬйИх в почвах
2.1.9. Биохимический анализ зеленой массы укропа
2.1.10. Анализ зараженности растений корневыми гнилями
2.1.11. Оптимизация параметров культивирования штамма В. БиЫШя
11В в газовихревом биореакторе «БИОК»
2.1.12. Разработка препаративной формы споровой культуры штамма
В. зиЫШь 11В
2.1.13. Токсико-гигиеническая оценка штаммов
2.1.14. Статистическая обработка результатов
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
2.2.1. Культурально-морфологические и физиолого-биохимические свойства штамма Я янЬй7А 49РН
2.2.2. Токсико-гигиеническая характеристика штамма В. зиЬИНя

2.2.3. Антагонистическая активность эндофитных штаммов В. зиЬННз
2.2.4. Антибиотическая активность метаболитов бактерий
2.2.5. Возможные механизмы проявления антагонистической активности исследуемыми штаммами В. тЫШ&
2.2.6. Взаимоотношения эндофитных штаммов В. быЫШз с другими видами бактерий
2.2.7. Антагонистическая активность исследуемых штаммов к микромицетам в почве
2.2.8. Регуляция роста растений эндофитными представителями
В. яиЫШБ
2.2.9. Влияние бактерий В. виЫШз 11В на рост и некоторые биохимические показатели укропа в закрытом грунте
2.2.10. Разработка биофунгицида на основе штамма В. эиЬИПя 11В

для повышения устойчивости и продуктивности зеленных культур
Заключение
Выводы
Список использованных литературных источников

Для выявлении каталазы бактерии сеяли штрихом в чашки Петри на МПА и инкубировали 24 ч при 37°С. Затем культуру заливали раствор 10%-ной Н202. При наличии каталазы наблюдалась реакция «вскипания».
Для выявления липолитической активности штамм высевали штрихом на среду состава: твин-80 - 1%, 10%-ный раствор СаС12 - 0,1%, агар - 4%, фосфатный буфер, pH 7,4. Чашки Петри выдерживали 24 ч при 37°С и оценивали наличие непрозрачной зоны кальциевых солей.
Лецитиназную активность определяли при выращивании бактерий на МТТБ с добавлением яичного желтка. Пробирки инокулировали клетками В. яиЫШя 49РН и инкубировали в течение 24 ч в термостате. О наличии лецити-назной активности судили по появлению мути и/или хлопьев.
Для определения способности микроорганизма утилизировать углеводы использовали среду Гисса с глюкозой, лактозой, сахарозой и маннитом. Пробирки со средой засевали уколом и помещали в термостат на 2 суток при 37°С. Об утилизации микроорганизмом данного углевода с образованием кислоты свидетельствовало изменение окраски среды с зеленой на желтую.
Для оценки утилизации мочевины к 100 мл стерильного МПБ добавляли 1 г мочевины и 0,2 мл 1,6%-ного спиртового раствора крезолового красного. Среду заражали бактерией и инкубировали при 37°С 5 суток. О способности микроорганизма использовать мочевину судили по покраснению среды.
Способность использовать цитрат выявлялась на среде Козера [90]. Чашки засевали клетками В. янЬИИ-ч 49РН и через сутки регистрировали наличие роста.
Способность к выделению аммиака, сероводорода и индола детектировали при выращивании в пробирках с МПБ. Под пробки пробирок помещали отрезки красной лакмусовой бумаги (для обнаружения аммиака), фильтровальной бумаги, пропитанной 20%-ным раствором уксуснокислого свинца (реакция на сероводород) или насыщенным раствором щавелевой кислоты (для обнаружения индола). Инкубацию проводили 7 суток. По изменению цвета бумаги судили о выделении соответствующих соединений.