Состав и биологическая активность углеводных компонентов мицелия некоторых базидиомицетов

• Автор: Кожемякина, Наталья Владимировна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 150 с. : ил.

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ:

ГПС - глюкозо-пептонная среда

ИЛ - интерлейкин

ИРО - индекс роста опухоли

ИЭ - индекс эффективности

ИФН - интерферон

ММ - молекулярная масса

МПД - максимально переносимая доза

НФр - нерастворимая углеводная фракция, выделенная из мицелия грибов

РФр - растворимая углеводная фракция, выделенная из мицелия грибов

ППС - перитонеальная промывная среда

СМФ - система мононуклеарных фагоцитов
ЦПМ ~ цитоплазматическая мембрана
ФНО - фактор некроза опухолей
ЭПС - экзополисахарид
LAK-клетки - NK-клетки, активированные цитокинами (lymphokine-activated killer)
МНС - главный комплекс гистосовместимости (major histocompability complex) NK -естественные киллеры (natural killer)

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА Г ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Условия культивирования базидиальных грибов
1.2 Характеристика биологически активных полисахаридов из базидиальных грибов
1.3 Иммуностимулирующее действие грибных полисахаридов
1.4 Противоопухолевое действие грибных полисахаридов
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИСС ЛЕДОВ АЛИЯ
2.1 Характеристика базидиомицетов
2.2'Культивирование базидиомицетов на плотных питательных
средах
2.3 Получение биомассы мицелия грибов в глубинных условиях
2.4 Выделение экзополисахаридов
2.5 Выделение полисахаридных фракций из мицелия грибов
2.6 Физико-химический анализ мицелия грибов, выделенных эндо- и экзополисахаридов
2.6.1 Определение редуцирующих сахаров
2.6.2 Определение а -аминного азота:
2.6.3 Определение зольности
2.6.4 Определение концентрации белка
2.6.5 Перйодатное окисление
2.6.6 Определение качественного и количественного моносахаридного состава мицелия и фракций
2.6.7 Определение показателей удельного вращения
2.6.8 Г ель-хроматография
2.6.9 ИК-спектроскопия.;

2.7 Изучение иммунобиологической активности мицелия, эндо- и экзополисахаридов базидиальных грибов
2.7.1 Получение монослойной культуры перитонеальных макрофагов
2.712 Оценка способности макрофагов к распластыванию на стекле:
2.7.3 Определение поглотительной способности макрофагов:
2.7.4 Определение микробоцидности макрофагов:
2.8 Оценка острой токсичности
2.9 Определение противоопухолевой активности полисахаридных фракций
2.10 Обработка результатов экспериментов
РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
ГЛАВА 3. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ БАЗИДИОМИЦЕТОВ:
3.1 Выращивание базидиомицетов на плотных питательных средах
3.2 Глубинное культивирование грибов

3.2.1 Подбор оптимального состава среды для накопления биомассы. 62 3:2.2 Влияние исходных значений pH среды на выход биомассы
мицелия
3.2:3 Влияние других условий культивирования на выход биомассы
3.3 Изучение динамики накопления биомассы мицелия и утилизации
источников питания в процессе культивирования
ГЛАВА 4 ИЗУЧЕНИЕ СОСТАВА И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МИЦЕЛИЯ, ЭКЗО- И ЭНДОПОЛИСАХАРИДОВ
ГРИБОВ
4.1 Изучение состава мицелия и физико-химических свойств и состава выделенных из него углеводных фракций
4.1.1 Изучение состава фракций и мицелия
4.1.2 Типы гликозидных связей и их соотношение во фракциях
4.1.3 Гель-хроматография растворимых фракций мицелия грибов
4.2 Изучение экзополисахарида, синтезируемого в процессе

1.4 ПРОТИВООПУХОЛЕВОЕ ДЕЙСТВИЕ ГРИБНЫХ ПОЛИСАХАРИДОВ
В результате онкологических заболеваний ежегодно во всем мире умирают миллионы людей. На фоне неуклонного роста заболеваемости раком предстательной железы, прямой кишки, молочной железы и тела матки, меланомой и другими злокачественными новообразованиями кожи в структуре заболеваемости на первом месте стоит рак молочной железы у женщин и рак легкого у мужчин [23]. Несмотря на открытия в области молекулярной биологии опухолевых клеток, многообразие схем хирургического, радиационного и фармакологического воздействий на различные этапы и звенья опухолевого роста, проблема создания эффективных методов лечения до сих пор остается очень актуальной. В последнее время особое внимание уделяется разработке новых лекарственных средств, избирательно действующих на опухолевые клетки, а также иммуностимуляторов и модификаторов биологического ответа [40, 162, 203].
Установлено, что полисахариды, выделенные из базидиальных грибов семейств Polyporaceae, Tricholomataceae, Agaricaceae обладают онкостатическим действием [188, 191, 213, 215]. В Японии выпускается около десятка препаратов на основе гликанов, полученных из плодовых тел высших базидиомицетов, которые составляют около 30% рынка онкостатиков и иммунокорректоров. Наиболее известные коммерчески доступные полисахариды, получаемые из базидиальных грибов, — лентинан (из L. edodcs), PSP и PSK (крестин) (из Т. versicolor) и сонифилан (шизофиллан, SPG) (из
S. commune). В плодовых телах G. lucidum обнаружен онкостатический и иммуностимулирующий полисахарид - ганодеран, P. ostreatus — плевран, G.frondosa - грифолан, F.velutipes — фламмулин [69]. В Российском Онкологическом научном центре РАМН (РОНЦ РАМН) в течение 50 лет ведутся работы по созданию средств для лечения злокачественных опухолей на