Оценка адгезивных свойств штамма Yersinia pestis EV НИИЭГ на модели эритроцитов

• Автор: Ивонин, Алексей Геннадьевич
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 122 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1 Л. Современные представления об адгезивной способности бактерий

1.2. Адгезивные свойства чумного микроба

1.3. Методы изучения адгезии бактерий к клеткам макроорганизма

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

2.1.1. Объекты исследований

2.1.2. Основные реактивы, используемые в работе
2.1.3. Оборудование и техника измерений
2.1.4. Приготовление суспензии бактерий
2.1.5. Приготовление суспензии эритроцитов
2.1.6. Обработка эритроцитов формалином и танином
2.1.7. Получение сыворотки и плазмы крови человека
2.1.8. Оценка адгезивной способности бактерий на модели эритроцитов традиционными методами
2.1.9. Оценка гидрофобных свойств бактериальных клеток
2.1.10. Оценка гемагглютинирующей активности бактерий
2.1.11. Обработка бактерий трипсином
2.1.12. Обработка экспериментальных данных
2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.2.1. Оценка адгезивных свойств штамма У. рез'Пз ЕУ НИИЭГ
на модели эритроцитов при помощи традиционных методов
2.2.2. Разработка фотоколориметрического метода оценки адгезивных свойств штамма У. резИз ЕУ НИИЭГ на модели эритроцитов
человека
2.2.2.1. Выявление возможности регистрации адгезии бактерий к эритро-
цитам с помощью фотоколориметрии
2.2.2.2. Выбор оптимальных и стандартных условий для оценки адгезивной активности штамма V. резНз ЕУ НИИЭГ
2.2.3. Исследование влияния условий культивирования бактерий Г. резИя ЕУ НИИЭГ и физиологического состояния микробной культуры на адгезивные свойства штамма
2.2.4. Определение гидрофобных свойств бактерий У. реяйз ЕУ НИИЭГ
2.2.5. Сравнение адгезивности и гемагглютиниругощей активности бактерий У. реяйз ЕУ НИИЭГ
2.2.6. Оценка влияния трипсина и высокой температуры
на адгезивную способность бактерий У. резПз ЕУ НИИЭГ
2.2.7. Адгезивные свойства штамма У. резПз ЕУ НИИЭГ в отношении эритроцитов различных доноров
2.2.8. Адгезивные свойства штамма У. раз-Из ЕУ НИИЭГ в отношении эритроцитов различных видов животных
2.2.9. Влияние антибиотиков на адгезию бактерий У. реяШ ЕУ НИИЭГ
к эритроцитам человека
2.2.10. Влияние плазмы и сыворотки крови, а также их отдельных компонентов на адгезию бактерий У. резПз ЕУ НИИЭГ к эритроцитам человека
2.2.11. Исследование механизма действия сыворотки крови и её компонентов на адгезию бактерий У. реяНз ЕУ НИИЭГ к эритроцитам человека 77
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4. ВЫВОДЫ
5. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ААК - адгезивно-активные колонии АХ - агар Хоттингера
БФАЭ - бактериофиксирующая активность эритроцитов ГВ - генцианвиолет
ГРМ-агар - агар на основе гидролизата мясокостной муки ИАМ - индекс адгезии микроорганизма
К - коэффициент участия эритроцитов в адгезивном процессе
МПА - мясо-пептонный агар
ОП - оптическая плотность
ПА -- показатель адгезии
ПГ - показатель гидрофобности
РГА - реакция гемагглютинации
СПА - средний показатель адгезии

2.1.3. Оборудование и техника измерений
Стерилизацию питательных сред проводили в паровом стерилизаторе ВК-75-01 (ОАО "Тюменский завод медицинского оборудования", г. Тюмень) в режиме: рабочее давление 150 кПа, температура 110°С, время
стерилизационной выдержки - 30 мин.
Измерение pH растворов и сред осуществляли с помощью pH метра рН-150М (РУП «Гомельский завод измерительных приборов», г. Гомель) в соответствии с инструкцией к прибору.
Микроскопию объектов производили, пользуясь световым микроскопом «Миктрон-400М» (ООО «Петролазер», г. Санкт-Петербург), фотографирование микропрепаратов проводили при помощи цифровой видеокамеры ОСЕ-1, подключенной к микроскопу.
Определение концентрации эритроцитов в суспензии осуществляли в счетной камере Горяева при 80-кратном увеличении микроскопа по общепринятой методике.
Определение оптической плотности (ОП) суспензий микробных клеток проводили на колориметре фотоэлектрическом концентрационном КФК-2 (ЗОМЗ, г. Загорск) при длине волны проходящего света 540 нм, рабочем объеме кюветы 2,3 мл и длине оптического пути кюветы 5 мм.
2.1.4. Приготовление суспензии бактерий
Для выращивания клеток Г. детгй ЕУ НИИЭГ применяли питательную среду на основе гидролизата рыбной муки - ГРМ-агар (pH 7,2) (ФГУН ГНЦПМБ, г. Оболенск), а также мясо-пептонный агар (МПА) (pH 7,2) и агар Хоттингера (АХ) (pH 7,2), приготовленные в лабораторных условиях. В ряде экспериментов в питательные среды вносили дополнительные ингридиенты: сульфит натрия (1:30000) и генцианвиолет (ГВ) (1:100000). Культуры бактерий