Особенности морфогенеза некоторых видов луков подрода Melanocrommyum в культуре in vitro

• Автор: Полубоярова, Татьяна Владимировна
• Шифр специальности: 03.02.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 115 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л. Подрод Melanocrommyum: современная таксономия, морфология и

географическое распространение

1.2. Традиционные методы размножения луков подрода Melanocrommyum

1.3. Биотехнологические подходы к размножению декоративных растений

1.4. Органогенез in vitro: современные концепции компетенции,

детерминации и дифференциации тканей

1.5. Методы размножения in vitro представителей рода Allium

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования и методы культивирования in vitro
2.2. Цитоморфологические и гистологические исследования
ГЛАВА 3 БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ВИДОВ
ПОДРОДА MELANOCROMMYUM В УСЛОВИЯХ ЛЕСОСТЕПНОЙ ЗОНЫ ЗАПАДНОЙ СИБИРИ
3.1. Природно-климатические условия района интродукции
3.2. Морфологическая характеристика A. altissimum и A. giganteum
3.3. Сезонный ритм развития луков в условиях интродукции
3.4. Семенное и вегетативное размножение
ГЛАВА 4 МОРФОГЕНЕТИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ РАЗЛИЧНЫХ ТИПОВ ЭКСПЛАНТОВ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ ПОДРОДА MELANOCROMMYUM В КУЛЬТУРЕ IN VITRO
4.1. Экспланты - семена
4.2. Экспланты - фрагменты луковиц с частью донца и почки
возобновления
4.3. Экспланты - флоральные органы

ГЛАВА 5 ОСОБЕННОСТИ РЕГЕНЕРАЦИИ ПОБЕГОВ ALLIUM ALTISSIMUM В КУЛЬТУРЕ IN VITRO ИЗ БУТОНОВ
5.1. Выявление маркеров для определения сроков изоляции бутонов
5.2. Гистологический анализ бутонов на начальных этапах культивирования (0-14 дней)
5.3. Процесс регенерации побегов A. altissimum in vitro
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
2iP - 2-изопентениладенин
2,4-Д - 2,4 дихлорфеноксиуксусная кислота
ADS - аденин сульфата
В 5 - питательная среда Гамборга и Эвелега
BDS - питательная среда Данстена и Шорта
MS - питательная среда Мурасиге и Скуга
TDZ - тидиазурон
БАП - 6-бензиламинопурин
ГК3 - гибберелловая кислота (кинетин)
ИМК - индолилмасляную кислоту ИУК - индолилуксусная кислота КН -6-фурфуриламинопурин НУК нафтилуксусная кислота ТГТ-триапентинол

Исследования по микроклональному размножению проводили с использованием оборудования для биотехнологических исследований. Для приготовления и стерилизации сред использовались колбы Эрленмейера на 300 и 500 мл, мерные колбы на 100, 250, 500 и 1000 мл, стаканы химические на 500 и 1000 мл, цилиндры различного объема, пипетки градуированные на 0.1; 0.5; 1; 2; 5; 10мл.
Для работы с эксплантами и их культивирования in vitro использовали чашки Петри различного диаметра, колбы на 50, 75 и 100 мл, пробирки, спиртовые горелки, пинцеты и скальпели.
Стерилизацию сред и дистиллированной воды проводили в автоклаве при давлении 1атм и температуре 120°С в течение 15-30 мин (в зависимости от объема среды).
Посуду стерилизовали в сухожарочном шкафу при температуре 220°С в течение двух часов.
Перед использованием помещение для проведения асептических работ облучали в течение 20-30 мин с помощью ультрафиолетовых бактерицидных ламп. Работы с стерильными культурами проводили в ламинарном боксе. Перед началом работы внутреннюю поверхность ламинара протирали 96 % этиловым спиртом.
Стерилизация эксплантов
Стерилизация семян
Использовали два способа стерилизации семян. Первый способ: семена или коробочки с семенами помещали в марлевый мешочек и погружали в 20 %-ный раствор Domestos, содержащий 5 % гипохлорита натрия и ставили на качалку. После стерилизации семена трехкратно промывали стерильной дистиллированной водой. Второй способ - семена погружали на 30 сек в 70% этиловый спирт и затем на 10 - 15 минут в 0.2% раствор хлорида ртути (II), с последующим четырех-кратным промыванием в стерильной