Особенности размножения Ribes aureum Pursh и Vaccinium Uliginosum L. в культуре IN VITRO

• Автор: Эрст, Анна Алексеевна
• Шифр специальности: 03.02.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Барнаул
• Количество страниц: 165 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Состояние изучения проблемы (обзор литературы)

ЕЕ Использование методов биотехнологии в системе сохранения

и воспроизводства ценных генотипов растений

Е Е Е Микроразмножение путем активации развития меристем

Е 1.2. Микроразмножение путем индукции адвентивных почек тканями экспланта

Е ЕЗ. Основные стадии микроразмножения

1.2. Факторы, влияющие на процессы микроразмножения

в культуре in vitro
ЕЗ. Идентификация ягодных культур на основе молекулярногенетических маркеров
Е4. Микроразмножение представителей подсемейства Vaccinioideae
Amott
Е5. Микроразмножение представителей семейства Grossulariaceae DC. 56 ГЛАВА 2. Материалы и методы исследования
ГЛАВА 3. Электрофоретическое изучение водосолерастворимой фракции
белков семян Ribes аигеит и Vaccinium uliginosum
ГЛАВА 4. Основные стадии размножения сортов Ribes аигеит
и Vaccinium uliginosum в культуре in vitro
4.Е Введение эксплантов в культуру in vitro
4.2. Особенности этапа собственно размножения
4.3. Укоренение побегов in vitro 109 ГЛАВА 5. Адаптация растений-регенерантов к условиям выращивания
ex vitro
ГЛАВА 6. Экономическая эффективность применения метода
микроразмножения Ribes аигеит и Vaccinium uliginosum
ВЫВОДЫ ,
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 13
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
А - среда Андерсона (1984);
АБК - абсцизовая кислота;
АУ - активированный уголь;
БАП - 6-бензиламинопурин;
ГК3 - гибберелловая кислота;
ДСН - додецилсульфат натрия;
Зн - зеатин;
ИМК - Р-индолилмасляная кислота;
ИПА - 2-изопентиладенин;
ИПК - Р-индолилпропионовая кислота;
ИУК - р-индолилуксусная кислота;
КМ - среда Као и Михайлюка (1975);
Кн - 6-фурфуриламинопурин (кинетин);
Л - среда Лепуавра (1977);
ЛФ - среда Ли и де Фоссарда;
МК - среда Мак Коуна (1980);
МС - среда Мурасиге и Скуга (1962);
НУК - а-нафтилуксусная кислота;
ПААТ - полиакриламидный гель;
ПЭГ - полиэтиленгликоль;
ТЕМЕД - тетраметилэтилендиамин;
ТИБК - трийодбензойная кислота;
ТМ - среда Такаяма, Мисава, Ко и Мисато (1977). ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота;
2, 4-Д - 2, 4-дихлорфеноксиуксусная кислота;
В5 - среда Гамборга и Эвелега (1968).
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы. В настоящее время особую актуальность имеют исследования по разработке методов сохранения растений, ареалы и численность которых резко снижается, а также для уникальных форм, сортов и генотипов растений, расширяющих и улучшающих сортимент возделываемых растений. В связи с прогрессом селекции и появлением большого количества новых сортов, имеющих сложное генетическое происхождение, технологии выращивания посадочного материала требуют усовершенствования (Соловьева, 2005).
Одними из новых и перспективных ягодных культур для Западной Сибири являются смородина золотистая (Ribes aureum Pursh), и голубика топяная (Vactinium uliginosum L.). Смородина золотистая представляет интерес в связи с поздним, по сравнению с другими видами смородины, созреванием плодов, жаро- й засухоустойчивостью, она практически не поражается болезнями и редко повреждается вредителями (Ягудина, 1976). Голубика топяная, широко распространенная на территории Западной Сибири, хорошо зарекомендовала себя в условиях интродукции (Снакина,
2007). Сорта североамериканской голубики щитковой (V. corymbosum L.), имеющие огромный спрос на мировом потребительском рынке, в Сибири недостаточно зимостойки. Одной из особенностей многих перспективных сортов R. аигеит и V. uliginosum является их невысокая способность к воспроизводству при традиционных способах размножения. Применение современных методов вегетативного размножения, таких как клональное микроразмножение, оправдано и экономически эффективно, особенно в отношении ягодных культур (Ruzic, Lazic, 2006). Использование методов размножения in vitro является оптимальным решением задачи как для размножения растений с нарушенным процессом воспроизводства, так и для

подавлять деление и рост клеток экспланта. Помимо введения непосредственно в питательную среду, можно все операции по изолированию эксплантов проводить в- антиоксидантных растворах или изолированные экспланты оставлять на несколько минут в растворе с антиоксидантами (Антрощенко, 1997). Наиболее широко в последнее время используют в питательных средах для предотвращения фенольного окисления ряд антиоксидантов: аскорбиновую кислоту (АК), глютатион, дитиотриэтол, диэтилдитиокарбамат (ДИЕКА), поливинилпирролидон (ПВП) (Муромцев и др., 1990; Калинин, 1992). Использование одного из указанных антиоксидантов при клональном микроразмножении смородины не оказало положительного эффекта в связи с тем, что каждый антиоксидант действует на определенный фермент, блокируя его; и не реагирует на другие ферменты, которые окисляют фенолы растений (Антрощенко, 1997). Каждый из трех компонентов предложенной, смеси' блокирует определенные ферменты: ДИЕКА блокирует полифенолоксидазу, АК - аскорбиноксидазу, ЭДТА защищает фенолы от необратимого ингибирования" хинонами (продуктами окисления фенолов).
Отрицательные результаты с использованием, АК могут быть связаны с ее разрушением при автоклавировании, хотя некоторые исследователи подтверждают положительное влияние на эксплант аскорбиновой кислоты (Georg, Sherrington; 1984). В. Хилдебрандт и П.М. Харней (Hildebrandt, Harney, 1988) показали эффективность использования аскорбиновой или лимонной кислот, стерилизованных через фильтр- для выращивания эксплантов Pelargonium х hortorum. Добавление различных антиоксидантов в начальной фазе культуры яблони сорта Tydeman’s Early Worcester приводило к уменьшению экссудации фенолов и повышению1 процента выживаемости (Modgil et al., 1999).
Для предотвращения негативного влияния продуктов фенольного окисления на экспланты используют адсорбирующие вещества - АУ или