Получение препаратов О-антигенов Vibrio cholerae для производства холерных химических вакцин

• Автор: Алешина, Юлия Александровна
• Шифр специальности: 03.02.03, 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 140 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л. Протективные антигены холерных вибрионов

1.2. Методы и технологии культивирования холерного вибриона

1.3. Применение ультрафильтрации для концентрирования

и очистки антигенов

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2Л. Оборудование и приборы
2.2. Материалы
2.2.1. Бактериальные штаммы
2.2.2. Лабораторные животные
2.2.3. Сыворотки, питательные среды, реактивы и растворы
2.3. Методы исследования
2.3.1. Биологические методы
2.3.2. Физико-химические и биохимические методы
2.3.3. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. ВЫЯВЛЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АТОКСИГЕННЫХ ШТАММОВ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА - ПРОДУЦЕНТОВ О-АНТИГЕНОВ 5
3.1. Изучение микробиологических свойств атоксигенных штаммов Vibrio cholerae - продуцентов О-антигенов
3.2. Исследование процесса культивирования атоксигенных штаммов Vibrio cholerae - продуцентов О-антигенов

3.3. Определение биокинетических особенностей процесса глубинного культивирования атоксигенных штаммов холерного вибриона - продуцентов О-антигенов
ГЛАВА 4. СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ О-АНТИГЕНОВ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ
4.1. Определение эффективности мембран 20 кДа для концентрирования О-антигена штамма Vibrio cholerae М41 серовара Огава
4.2. Интенсификация процесса ультрафильтрации
4.2.1. Определение эффективности различного типа мембран для концентрирования О-антигена штамма Vibrio cholerae М41 серовара Огава
4.2.2. Установление оптимальных барометрических характеристик процесса ультрафильтрации
4.2.3. Изучение влияния температуры на эффективность концентрирования О-антигена штамма Vibrio cholerae М41 серовара Огава
4.2.4. Использование усовершенствованной технологии концентрирования О-антигена штамма Vibrio cholerae М41 серовара Огава в производственном процессе получения коммерческой холерной химической вакцины
4.3. Применение метода тангенциальной ультрафильтрации для концентрирования О-антигенов атоксигенных штаммов холерных вибрионов
ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТОВ О-АНТИГЕНОВ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА И ХОЛЕРНОЙ ХИМИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ
5.1. Характеристики препаратов О-антигенов атоксигенных штаммов холерного вибриона, полученных по разработанной технологии культивирования
5.2. Контроль прототипа новой холерной химической вакцины
5.3. Изучение свойств препаратов О-антигена штамма Vibrio cholerae М41 серовара Огава, полученных по усовершенствованной технологии концентрирования

5.4. Свойства коммерческой холерной вакцины, приготовленной по усовершенствованной технологии концентрирования
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

лых волокнах в 20-30 раз инактивированных формалином культур микроорганизмов [108].
Имеются сведения о способе получения экзотоксина A Pseudomonas ае-ruginosac с применением фильтрационных технологий. Полученную после культивирования токсинсодержащую культуральную жидкость осветляют методом микрофильтрации на плоскокамерных разделительных аппаратах, заправленных микропористыми капроновыми мембранами с диаметром пор 0,2 мкм. Осветленную токсинсодержащую жидкость концентрируют на полых волокнах с порогом пропускания 15 кДа, при этом рабочее давление не должно превышать 0,2 Мпа. Полученный фильтрат отбрасывают, а концентрат подвергают диафильтрации на этих же волокнах. Степень очистки экзотоксина от балластных примесей питательной среды составляет 99,9%, а выход целевого продукта 84,2% от исходного [93].
В технологии приготовлении поликомпонентной вакцины против Proteus vulgaris, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae для концентрирования очистки антигенов применяется ультрафильтрация и диафильтрация. При этом подчеркивается, что введение в процесс получения антигенов мембранных методов разделения упрощает технологию производства препарата, снижает энерго- и трудозатраты, и обеспечивает высокое качество (высокую степень чистоты) целевых продуктов за счет эффективного освобождения от балластных примесей питательной среды и низкомолекулярных бактериальных компонентов, не обладающих иммуногенной активностью [51].
Описан способ получения протективной белоксодержащей фракции бактерий, согласно которому концентрирование антигенов секретируемых К. pneumoniae К2 и Streptococcus pneumoniae типа 3 осуществляют ультрафильтрацией мембранами 30 кДа [63].
Концентрирование и очистку протективного внеклеточного антигена бруцелл проводят путем ультрафильтрации культуральной среды через фильтры с размером пор 30 кДа [59].