Гидрозольные препараты - бесприборные иммунохимические экспресс-диагностикумы

• Автор: Куклина, Светлана Анатольевна
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Киров
• Количество страниц: 109 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ И МОНИТОРИНГА ИНФЕКЦИОННЫХ И СОМАТИЧЕСКИХ ПАТОЛОГИЙ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ (обзор литературы)

1.1. Иммунохимические методы, их место в системе клинической

лабораторной диагностики

1.1.1 Прямые методы

1.1.2 Методы пассивной агглютинации

1.1.3 Индикаторные методы

1.1.4 Реакции связывания комплемента

1.2. Современные методы, близкие к иммунохимическим

1.3. Практические приложения - примеры конкретного применения иммунохимических методов
1.4. Особенности ряда диагностических препаратов, применяемых в иммунохимическом анализе
1.5. Гидрозольные препараты как экспрессные бесприборные диагностикумы
1.5.1. Особенности адсорбции биолигандов на гидрозольные
препараты
1.5.2 Ионная адсорбция
1.5.3 Хемосорбция в синтезе гидрозолей
1.5.4. Возможное влияние среды на протекание иммунохимических реакций
1.6. Выводы и постановка задач исследования
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1.Материалы исследования
2.2 Методы исследования
2.3. Статистическая обработка полученных результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Выбор типа и дозировки твердофазного носителя для реакции гидрозольной агглютинации
3.1.1. Коллоидный раствор улътрадисперсных алмазов (УДА) в качестве твердой фазы
3.1.2. Коллоидный раствор на основе органического материала (парафин) в качестве твердой фазы
3.1.3. Коллоидный раствор гексацианоферрата (II) железа (III) в качестве твердой фазы
3.2. Выбор типа и дозировки модификатора при хемосорбции
биолиганда на основе раствора гексацианоферрата (II)
железа(Ш)
3.3. Выбор и оптимизация состава разводящего раствора с учетом pH и ионной силы буфера при постановке реакции иммунохимической гидрозолыюй агглютинации
3.4. Выбор носителя для визуализагщи результатов реакции гидрозольной агглютинации
3.5. Экспериментальные данные по определению антител к вирусу H5N
(вирус птичьего гриппа) в сыворотке крови
3.6. Экспериментальные данные по определению антител к М.
Tuberculosis (туберкулез) в сыворотке крови
РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЙ ГИДРОЗОЛЕЙ В КЛИНИЧЕСКИХ
УСЛОВИЯХ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ
ДИССЕРТАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ.
Актуальность проблемы. Иммунохимические исследования являются важнейшим этапом в первичной диагностике различных инфекционных и соматических патологий. Идеология лабораторного анализа в медицине основана на понимании любого заболевания как реакции целого организма. Патологическое изменение функции какого-либо органа, ткани, группы клеток вызывает отклонение от нормальных показателей в работе других органов, тканей, систем. Наряду с неспецифическим, то есть свойственным для многих видов патологии проявлением отклонений, в большинстве случаев, наблюдаются особые, характерные лишь для данного заболевания, изменения внутренней среды организма. При инфекционных заболеваниях, а также соматических — это появление во внутренней среде организма возбудителя или его продуктов (токсины, антигены и т.д.) и иммунный ответ на возбудитель [17]. При развитии патологического состояния болезни в организме человека в его биологических жидкостях: крови, моче, слюне -появляются определенные маркеры - специфические вещества сложной, как правило, белковой природы. Эти специфические маркеры, ассоциированные с тем или иным заболеванием (например, антитела к ВИЧ, раковый эмбриональный антиген, НЬзА§ и т.д.), при помощи иммунохимических методов могут выявляться в количествах исчезающе малых: 1 нанограмм в миллилитре и менее, что соответствует очень ранним стадиям начала заболевания. Иммунохимические методы позволяют объективно и адекватно судить о правильности терапевтических либо иных методов лечения. Не менее важны эти методы и в ветеринарии, а также в работе самих биотехнологических производств для адекватного контроля качества выпускаемых препаратов.
В настоящее время во всём мире диагностика как собственно различных инфекционных и соматических патологий, так и мониторинг поствакцйнального иммунитета осуществляется при помощи приборных иммунохимических методов (наряду с длительными по времени и ещё

виде кислого ацетатного буфера. Методика нагружения Ге203 биолигандами, описанная в литературе [41], сводится в основном к следующему:
50 мг оксида активируют 2 мл 0,05 М ацетатного буфера pH 4,0 в течение определённого времени. Далее препарат подвергают центрифугированию, осадок ресуспендируют в том же буфере, содержащем очень малые количества (от 1 мкг/мл до 100 мкг/мл) биолиганда. Постановка реакции сводится к раститровке подлежащего анализу биоматериала в лунках круглодонных (и, V- образных) планшетов и внесению туда хорошо гомогенизированных суспензий нагруженного пигмента (гидрозоля). При положительной реакции фиксируется агглютинация, сводящаяся к быстрому формированию агрегатов частиц Ге203 на дне лунки. При отрицательной реакции агглютинация отсутствует.
Согласно литературе [41] оксид железа образует с уксусной кислотой и вообще с ацетатными буферными растворами комплексные соединения приблизительно следующего строения:
[Ге3(СН3СОО)6]+ОН“
При последующем смешении этих соединений с растворами белков ниже их изоэлектрической точки формируется «мицелла» приблизительно следующей структуры
[Ре3(СН3СОО)6]+ОН" +КНз+-К,
Где К-ИНД- белковый (биолигандный) компонент.
Следовательно, здесь основным инкрементом сорбции могут быть ионные взаимодействия. По мере увеличения положительного заряда в ядре мицеллы должно увеличиваться количество гидроксильных противоионов, а, следовательно, количество й прочность связывания биолиганда с Ре203. Для подтверждения этого предположения были взяты органические кислоты, имеющие силу (Ка, либо рКа) как меньше, так и больше уксусной кислоты, рассматриваемой в качестве базового соединения. Полученные экспериментальные данные впоследствии подтвердились на реальных системах: детекции миоглобина и антител к бледной трепонеме в сыворотке