Совершенствование технологии получения гаплоидных и дигаплоидных растений рапса (Brassica napus L.) и белокочанной капусты (Brassica oleracea L.) in vitro

• Автор: Май Дык Чунг
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 124 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Значение гаплоидии в селекции растений

1.2. Методы создания гаплоидных растений

1.3. Факторы, влияющие на получение гаплоидных растений in vitro

1.4. Создание гаплоидных растений различных видов Brassica..

ГЛАВА II. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Объекты исследований

2.2. Методы исследований
2.2.1. Условия культивирования изолированных эксплантов
2.2.2. Цитологические исследования
2.2.3. ПЦР - анализ растений рапса
2.2.4. Статическая обработка результатов исследований
ГЛАВА III. ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ ДИГАПЛОИДНЫХ РАСТЕНИЙ РАПСА (BRASSICA NAPUS) IN VITRO
3.1. Строение пыльника некоторых видов Brassica
3.2. Пути развития микроспор in vitro
3.3. Влияние стадии развития микроспора и расположения бутонов
в соцветии на процесс морфогенеза растений рапса
3.4. Зависимость морфогенеза от состава и консистенции питательной среды
3.5. Влияние различных методов предобработки соцветий и изолированных эксплантов на морфогенез
3.6. Влияние гормонального состава питательной среды на процесс андрогенеза

3.7. Формирование из эмбриоидов проростков и их дальнейшее клонирование
3.8. Доказательство гаплоидной природы растений-регенерантов рапса.
3.9. Адаптация растений-регенерантов in vivo и их колхицинирование.. 73 ЗЛО. Предложения для использования в селекционной практике
ГЛАВА IV. ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИЯ ГАПЛОИДНЫХ
РАСТЕНИЙ БЕЛОКОЧАННОЙ КАПУСТЫ (BRASSICA
OLERAСЕАЕ L.) IN VITRO
4.1. Культура изолированных пыльников и микроспор
4.2. Культура изолированных неопыленных завязей и семяпочек
4.3. Предложения для использования в селекционной практике.
ГЛАВА V. ИДЕНТИФИКАЦИЯ ГЕНА УСТОЙЧИВОСТИ РАСТЕНИЙ РАПСА К ВИРУСУ ЖЕЛТУХИ РЕПЫ (TURNIP
YELLOW VIRUS - TUYV)
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
БАП 6-бензиламинопурин
ИУК р-индолил-3 -уксусная кислота
НУК а-нафтилуксусная кислота
21р 2-изопентениладснин
2,4-Д 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота
МС Питательная среда Мурасиге и Скуга
В5 Питательная среда Гамборга
Питательная среда Нич

генеративно развивающихся донорных растений капусты при выращивании их в контролируемых условиях. Это объяснялось авторами вегетативным развитием растений перед цветением (Duijs J.G., Voorrips R.E., 1992).
Важным для эмбриогенеза является также время и место изолирования экспланта с донорного растения. Так, время сбора исходного растительного материала (бутонов) белокочанной капусты может зависеть от сорта. Например: для сортов Слава и Энхузен оптимальным временем для сбора бутонов было время суток после 13.00 часов, а для сорта Лангендикер -между 10.00 и 13.00 часами (Gorecka K., Krzyzanowska D., 2004).
Котлярова Е.Б. и др. (2005) в своей работе отмечает, что генотипы с большими нарушенями в формировании генеративных органов имеют большую способность к индукции андроклинии.
Таким образом, условия выращивания донорных растений могут быть сугубо индивидуальными как для каждого вида растений, так и для конкретного сорта.
Эффективность андрогенеза в значительной степени зависит и от стадии развития микроспор в момент введения пыльников в культуру in vitro. Из литературных данных следует, что для различных видов Brassica при культивировании пыльников или микроспор оптимальной является одноядерная сильно вакуолизированная стадия развития пыльцы (Dunwell J.M., 1985; Атанасов А., 1993; Давыдова Н.Н, 2008). Именно на этой стадии наблюдается преимущественный эмбриогенез и формирование растений. Однако оптимум для разных видов может варьировать от стадии тетрад до трехклеточного пыльцевого зерна. Для Brassica napns микроспоры от поздней одноядерной до ранней двухклеточной стадии являются хорошим материалом для андрогенеза in vitro (Pechan P.M., 1989). Соматические эмбриоиды, которые дифференцируются из микроспор, проходят все стадии развития, схожие с зиготическим зародышем. Цитологические исследования показали, что деление микроспор происходит при симметрическом митозе и эмбриоиды развиваются из кластера клеток, образованных