Создание диагностических тест-систем "Полимерная микросфера-биолиганд" медико-биологического применения

• Автор: Станишевский, Ярослав Михайлович
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 266 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современное состояние проблемы диагностирования заболеваний вирусной и бактериальной природы методом

реакции латексной агглютинации

1.2. Полимерные микросферы - носители биолигандов для создания диагностических тест-систем, используемых в

реакции латексной агглютинации

1.3. Способы конструирования диагностических тест-систем с использованием полимерных микросфер и

специфических биолигандов

1.3.1. Диагностические тест-системы, полученные физической адсорбцией специфических биолигандов на поверхность полимерных
микросфер
1.3.2. Диагностические тест-системы, полученные при ковалентном связывании функциональных групп специфических биолигандов и полимерных
микросфер
1.3.3. Диагностические тест-системы, полученные иммобилизацией через спейсер специфических биолигандов на поверхность полимерных
микросфер
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Исходные вещества
2.2 Методы исследования
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ
ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Синтез функциональных полимерных микросфер и
изучение их физико-химических свойств

3.1.1.Синтез полимерных микросфер в отсутствие
эмульгатора
3.1.2.Синтез полимерных микросфер методом
затравочной полимеризации
3.1.3.Синтез полимерных микросфер методом
дисперсионной полимеризации
3.2. Создание диагностических тест-систем на основе конъюгатов «полимерная микросфера-биолиганд»
различного целевого назначения
3.2.1. Получение тест-системы «полимерная микросфера-тиреоглобулин» для выявления аутоантител к
тиреоглобу лину
3.2.2. Получение тест-системы «полимерная микросфера-специфический иммуноглобулин G» для выявления
антигенов различной природы
3.2.3. Получение тест-системы «полимерная микросфера-желатина» для выявления сывороточного
фибронектина
3.2.4. Получение тест-системы «полимерная микросфера-вирус» для выявления антител к вирусам различной
природы
3.3. Разработка технологии создания диагностических тест-систем на основе конъюгатов «полимерная микросфера-биолиганд», работающих по принципу реакции латексной агглютинации
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ СОКРАЩЕНИЯ:
РЛА - реакция латексной агглютинации;
РНГА - реакция непрямой гемоагглютинации;
РИД - радиальная иммунодиффузия;
ИФА - имму но ферментный анализ;
РБА - реакция бактериальной агглютинации;
РМА - реакция микроагглютинация;
PH - реакции нейтрализации на культуре клеток;
ПМ - полимерные микросферы;
ФН - сывороточный фибронектин;
IgG - иммуноглобулин G; аАТ - аутоантитела;
ТГ - тиреоглобулин;
БР - буферный раствор;
ПАВ - поверхностно-активные вещества.
Определения:
Биолиганд (ligand) (от лат. ligo - связываю) - биомолекула, способная связываться с комплементарным участком детектируемого компонента (антигена, антитела);
Спейсер (англ. spacer) - связующие звено между полимерной матрицей и иммобилизованной биомолекулой.
человеческий сывороточный альбумин (ЧСА), а полимерного носителя -полистирольные микросферы. Значения pH изменяли в интервале 4,0 - 7,7, используя ацетат-уксуснокислый буфер (рН=4,0; 5,0) и фосфатный буфер (рН=5,8; 6,8; 7,7; 9,0). Изоэлектрическая точка ЧСА составляет рН=4,7. Было установлено, что максимальная адсорбция молекул ЧСА на поверхность полистирольных микросфер наблюдается при pH среды 5,0 и минимальна при pH 7,7. Для максимальной плотности упаковки белка на поверхности полимерных микросфер необходимо проводить адсорбцию белка при значениях pH среды, лежащих вблизи изоэлектрической точки ЧСА. По мере удаления от изоэлектрической точки ЧСА (при смещении pH среды в щелочную область) количество белка, адсорбированного на поверхности полистирольных микросфер, уменьшается, а адсорбция ЧСА на поверхность полистирольных микросфер при pH среды 4,0 приводит к потере агрегативной устойчивости системы. Со смещением pH среды в щелочную область уменьшается и сродство между молекулами ЧСА и полистирольной поверхностью микросфер.
На физическую адсорбцию белков существенное влияние оказывает и величина ионной силы раствора [136]. Так, при адсорбции ЧСА в диапазоне pH от 3,0 до 11 было изучено влияние ионной силы среды, которую меняли в диапазоне значений от 0,001 М до 0,3 М. В кислой области pH < 4,7 ниже изоэлектрической точки ЧСА, количество адсорбированного белка на поверхности полистирольных микросфер увеличивается с повышением ионной силы раствора. В щелочной области, pH > 7, с увеличением ионной силы раствора с 0,001 М до 0,1 М наблюдалось уменьшение адсорбированного белка на поверхность полимерных микросфер с 2 до 0,3 мг/м2. Высокая ионная сила >0,1 не препятствовала процессу физической адсорбции ЧСА на поверхность полистирольных микросфер, однако, повышение ионной силы раствора способствовало протеканию спонтанной агрегации полистирольных микросфер. Максимальная адсорбция ЧСА (3 мг/м2) и отсутствие