Функциональная идентификация и транспортные свойства Cl-/H+-антипортера мембран аппарата Гольджи клеток корня галофита Suaeda altissima(L.)Pall.

• Автор: Шувалов, Алексей Витальевич
• Шифр специальности: 03.01.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 112 с. : ил.

Оглавление
Введение
1. Обзор литературы
1.1. Растения в условиях почвенного засоления
1.2. Значение СГ для растений в норме и повреждающее действие СГ в условиях засоления
1.3. Движущие силы транспорта анионов через мембраны клеток растений
1.4. Семейство белков CLC (ChLoride Channel) и их распространенность в живых организмах
1.5. Семейство CLC в Arabidopsis thaliana: гены, функции и физиологическая роль
1.5.1. AtCLCa - нитратный транспортер, вовлеченный в накоплении нитрата в вакуолях
1.5.2. AtCLCb - нитратный транспортер, экспрессирующийся в вакуолях на ранних стадиях развития
1.5.3. AtCLCc - хлоридный транспортер, вовлеченный в регуляцию работы устьичного аппарата и солеустойчивость
1.5.4. AtCLCd - хлоридный транспортер, колокализованный с АТФазой V-типа в мембранах аппарата Гольджи
1.5.5. AtCLCe -анионный канал или транспортер, локализованный в тилакоидах хлоропластов
1.5.6. AtCLCf- канал или транспортер с неизвестной функцией, локализованный в мембранах аппарата Гольджи
1.5.7. AtCLCg - хлоридный транспортер, локализованный в тонопласте
1.6. Семейство CLC у других растений
1.7. Структурная организация CLC транспортеров
1.8. Предполагаемый молекулярный механизм СГ/ГГ-обмена
1.9. Физиология солеустойчивости галофита Suaeda altissima

2. Объекты и методы исследования
2.1. Объект исследования
2.2. Культивирование 5. аШвята
2.3. Выделение частично очищенной микросомальной фракций из клеток корня
5. аЛтш'тп
2.4. Разделение фракции ЧОМ в непрерывном градиенте плотности йодиксанола и получение фракции обогащенной мембранами аппарата Гольджи
2.5. Регистрация СГ/Н+-обмена через везикулярную мембрану
2.6. Обнаружение генерации трансмембранного электрического потенциала
2.7. Оценка внутривезикулярных концентраций К+ и Ыа'
2.8. Аналитические методы
2.9. Статистика
3. Результаты и обсуждение
3.1. Регистрация С17РГ-обмена во фракции частично очищенных мембран (ЧОМ), выделенной из клеток корня 5. а/Гшйия
3.1.1. Доказательства компетентности фракции ЧОМ для обнаружения трансмембранного С17Н+-обмена
3.1.2. Регистрация СГ/Н+-обмена во фракции ЧОМ с помощью ДрН-индикатора АО и Д(//-индикатора сафранина
3.1.3. Регистрация С17Н+-обмена во фракции ЧОМ с помощью рН-индикатора пиранина
3.2. Разделение мембран центрифугированием в градиенте плотности йодиксанола
3.3. Регистрация электрогенного СГ/РГ-обмена во фракции МАГ
3.4. Свойства С17РГ-антипортера
3.4.1. Электрогенные свойства С17НГ-антипортера
3.4.2. С17Н+-антипортер характеризуется односторонней проводимостью
3.4.3. рН-зависимость С17РГ-антипортера
3.4.4. Влияние ингибиторов анионного транспорта на СГ/Н+-обмен
3.4.5. Анионная специфичность С17Н+-антипортера
Заключение
Список литературы

2010). EcCLC представляет собой гомодимер с антипараллельной архитектурой, каждая субъединица которого содержит независимый ион-транспортирующий канал (Dutzler 2006; Dutzler et al., 2002, 2003). Прокариотические белки CLC содержат 18 а-спиралей, 17 из которых частично или полностью погружены в липидный бислой (Dutzer, 2006). Эукариотический CmCLC, также представляет собой гомодимер с антипараллельной архитектурой. Каждая субъединица CmCLC содержит 24 а-спирали и 6 (3-складок (рис. 2). CmCLC также характеризуется наличием цитоплазматических CBS доменов, которые отсутствуют у прокариотических CLC транспортеров (рис. 2) (Feng et al., 2010).
Эукариотические CLC имеют два CBS (цистотионин-(3-синтетазных) домена на С конце, CBS1 и CBS2 (рис. 2) (Jentsch et al., 2008). CBS домены вовлечены в связывание нуклеотидов, которые выполняют регуляторные функции (Ignoul, Eggermont, 2005). AtCLCa также содержит 2 CBS домена в С-концевой области. Эксперименты, выполненные с использованием