Генетико-биохимическая дифференциация и происхождение карликовых форм яблони сибирской Malus baccata (L.)Borkh

• Автор: Кузнецова, Елена Вячеславовна
• Шифр специальности: 03.01.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Иркутск
• Количество страниц: 139 с. : ил.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Систематика рода Malus
1.2. РАСПРОСТРАНЕНИЕ РОДА MALUS
1.3. Особенности яблони ягодной (сибирской) - Malus вассата (L.) Borkh
1.3. МИКРОСАТЕЛЛИТНАЯ ДНК И ЕЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ В ПОПУЛЯЦИЯХ
1.3.1. Микросателлитные повторы: механизмы возникновения и размножения в геноме
1.3.2. Применение микросателлитного анализа
1.3.3.Методика проведения анализа полиморфизмамикросателлитных локусов
1.4. СТРУКТУРА ПОПУЛЯЦИЙ
1.4.1. Эволюционные процессы в популяциях
1.4.2. Анализ генетической изменчивости
1.4.2.1. Поток генов
1.4.2.2. Частоты аллелей
1.4.2.3. Гетерозиготностъ
1.4.2.4. Эффективный размер популяции
1.4.2.5. Fst-критерий
1.5. АКТИВНОСТЬ ПЕРОКСИДАЗЫ - ТЕСТОВАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ФИЗИОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ КУЛЬТУРНЫХ РАСТЕНИЙ
1.6. ПЕРОКСИДАЗЫ РАСТЕНИЙ
1.7. КЛАССИФИКАЦИЯ ПЕРОКСИДАЗ
1.8. Реакции, катализируемые пероксидазой
1.9. МНОЖЕСТВЕ! ШОСТЬ МОЛЕКУЛЯРНЫХ ФОРМ ПЕРОКСИДАЗЫ
1.10. ГЕНЕТИЧЕСКИЙ КОНТРОЛЬ СИНТЕЗА ПЕРОКСИДАЗ
1.11. ЛОКАЛИЗАЦИЯ ПЕРОКСИДАЗ В РАСТИТЕЛЬНОЙ КЛЕТКЕ
1.12. Термостабильность пероксидазы
1.13. УЧАСТИЕ ПЕРОКСИДАЗЫ В ЛИГНИФИКАЦИИ И СУВЕРЕНИЗАЦИИ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ
1.14. Участие пероксидазы в дыхании растения
1.15. Изменение активности пероксидазы и количества фитогормонов при стрессовых ВОЗДЕЙСТВИЯХ НА РАСТЕНИЕ
1.16. ПЕРОКСИДАЗА и стресс
Заключение по литературному обзору
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Сбор материала
2.2. Морфометрия
2.3. Экстракция ДНК
2.4. Амплификация ДНК
2.5. Методы очистки амплифицированных фрагментов
2.5.1. Очистка амплифицированных фрагментов с помощью силики и гуанидин тиоцианата
2.5.2. Очистка амплифицированных фрагментов из 1%-ого агарозного геля с трис-ацететным буфером, без ЭДТА
2.6. Электрофоретические методы
2.6.1. Электрофорез микросателлитной ДНК в полиакриламидных гелях
2.6.2. Электрофорез ДНК в агарозных гелях
2.7. Определение нуклеотидной последовательности
2.8. Обработка данных микросателлитного анализа
2.9. Экстракция слабосвязанных с клеточной стенкой и растворимых (общих) ПЕРОКСИДАЗ
2.10. Электрофорез в полиакриламидном геле нативного белка
2.11.Окраска геля на пероксидазную активность
2.12. Определение активности пероксидазы

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. ИЗУЧЕНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА MALUS ВАССАТА ПО МОРФОЛОГИЧЕСКИМ ПРИЗНАКАМ
3.2. Изучение физиолого-биохимического разнообразия М. вассата
3.2.1. Динамика активности пероксидазы из листьев яблони сибирской в течение периода вегетации
3.2.2. Изучение спектра растворимой пероксидазы карликовых и высокорослых форм яблони сибирской
3.2.3. Изучение спектра слабосвязанной с клеточной стенкой пероксидазы карликовых и высокорослых форм яблони сибирской
3.3. Анализ генетического полиморфизма М. вассата
3.3.1. Изучение генетического полиморфизма яблони сибирской по микросателлитным локусам
3.3.2. Аначиз нуклеотидных последовательностей внутреннего транскрибируемого спейсера ITS1
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ
ПРИЛОЖЕНИЕ
Список используемых в работе сокращений
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
п.н. - пар нуклеотидов
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ITS 1 - внутренний некодирующий спейсер ядерной рДНК dNTP - дезоксирибонуклеотид трифосфаты мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота ИУК - индолил-уксусная кислота

от обычных растений, но наблюдали более высокий синтез сильнокислой изоформы с р1 3.5 (Газарян и др., 1993).
При повреждении корней пшеницы внеклеточная пероксидаза участвует в производстве перекиси. Эта мобильная форма пероксидазы увеличивает свою активность при поранении растения и выделяется в апопласт, где участвует в генерации активных форм кислорода (МЫЬауеуа et а1, 2001).
При электронно-цитохимическом исследовании клеток водорослей было показано, что пероксидаза находится в гранулах эндоплазматического ретикулума. При этом отмечено раздельное распределение пероксидазы и кислой фосфатазы (Роговин и др., 1996).
1.12. Термостабильность пероксидазы
Большой интерес вызывают работы по изучению молекулярных механизмов адаптации ферментов при температурных воздействиях. Увеличение ферментативной активности в процессе адаптации возможно за счет усиления биосинтеза фермента, синтеза новых изоформ и снятия ими ингибирующего эффекта (Титов, 1987).
У контрастных по термоустойчивости сортов томатов в ходе онтогенеза изучали активность и термостабильность пероксидазы и ее изоформ. У обоих сортов с возрастом увеличивалась термостабильность пероксидазы, причем у жаростойкого сорта это было выражено в большей степени. Во всех случаях после прогрева у жаростойкого сорта активность фермента сохранялась на более высоком уровне. Были обнаружены изоферменты пероксидазы, которые увеличивали активность при действии высоких температур. Установлено, что у жаростойкого сорта эти изоформы играют большую роль в изменении общей активности фермента (Ивакин, Грушин, 1986).
Низкотемпературный стресс приводит к перестройке белоксинтезирующей системы растения, что ведет к синтезу новых белков, обладающих криопротекторными свойствами (Гималов и др., 2004). Качественные и количественные трансформации изоэнзимного набора