Прооксидантные и антиоксидантные свойства пролина у растений и культивируемых клеток Thellungiella salsuginea.

• Автор: Сошинкова, Татьяна Николаевна
• Шифр специальности: 03.01.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 103 с. : 10 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Окислительный стресс

1.2Антиоксидантная защитная система

1 .ЗПролин как компонент защитной системы растений

1.3.1 Свойства и биосинтез пролина

1.3.2 Ключевые ферменты метаболизма пролина

1.3.3 Мультифункциональная роль пролина

1.3.4 Функционирование «пролинового цикла»

ГЛАВА II. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Объект исследования
2.2 Условия выращивания растений и культуры клеток
2.3 Условия проведения опытов
2.4 Определение содержания малонового диальдегида
2.5 Определение активности супероксиддисмутазы
2.6 Определение активности аскорбатпероксидазы
2.7 Определение внутриклеточного содержания пролина
2.8 Определение активности пролиндегидрогеназы
2.9 Определение содержания белка в ферментных препаратах
2.10 Методика нативного гель-элсктрофореза СОД и АП
2.11 Определение уровня транскрипции генов
2.12 Определение содержания свободного оксипролина

2.13 Математическая обработка данных
ГЛАВА 1П. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Развитие окислительного стресса при обработке пролином растений и культивируемых клеток Thellungiella аакгпеа в нормальных условиях культивирования
3.2 Развитие окислительного стресса при обработке пероксидом водорода растений и культивируемых клеток 27г. salsuginea
3.3 Особенности совместного действия Н2О2 и пролина на функционирование антиоксидантной системы растений и культивируемых клеток
3.4 Влияние пролина, Н202 и их совместного действия на изоферментный состав СОД и АП в растениях и культивируемых клетках
3.5 Влияние экзогенного пролина, Н202 и их совместного действия на экспрессию генов, кодирующих изоформы аскорбатпероксидазы и супероксиддисмутазы
3.6 Влияние пролина, Н202 и их совместного действия на экспрессию генов метаболизма пролина
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
Список цитируемой литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АФК активные формы кислорода
АП аскорбатпероксидаза
ОС окислительный стресс
СОД супероксиддисмутаза
Cu/Zn - СОД изоформа СОД, содержащая медь и цинк как кофакторы
Fe - СОД изоформа СОД, содержащая железо как кофактор
Мп СОД изоформа СОД, содержащая марганец как кофактор
ПО гваяколовая пероксидаза
КАТ каталаза
МДА малоновый диальдегид
ПОЛ перекисное окисление липидов мембран
ЦТК цикл трикарбоновых кислот
Р5С Д1- пирролин-2-карбоксилат
P5CDH А1- пирролин-5-карбоксилатдегидрогеназа
P5CS А1- пирролин-5-карбоксилатсинтетаза
P5CR А1- пирролин-5-карбоксилатредуктаза
PDH пролиндегидрогеназа
ОАТ орнитин-5-аминотрансфераза
PMSF фенилметилсульфонилфторид
DMSO диметилсульфооксид
ПВП поливинилпирролидон
DTT дитиотриитол
NBT нитросиний тетразолий
TEMED тетраметилэтилендиамин

водную культуру на 100% питательную среду Кнопа с микроэлементами по Хогланду (pH = 6,0). Для выращивания растений использовали пластиковые кюветы объёмом 4л. Питательный раствор меняли каждые 3-е суток.
Растения выращивали в условиях фитотрона при 12 - часовом световом периодом иод лампами Philips (F36W/54) при интенсивности светового потока в диапазоне ФАР 250 ± 50 мкмоль фотонов/м"2с''. Температура воздуха составляла 23 ± 5°С и 16 ± 5°С (день/ночь), относительная влажность воздуха - 55/70% (день/ночь).
Таблица 1. Состав питательной среды для выращивания растений в водной
культуре.
Питательные вещества Концентрация, мМ
Макроэлементы по Кнопу (с модификациями)
KN03
MgS04*7H20
(NH4)2HP04
Ca(N03)2*4H20
Микроэлементы по Хогленду (с
модификациями)
Н3В03 0,01452
MnS04*5H20 0,00066
ZnS04*7H20 0,00126