Спектр биологических активностей новых производных глицирретовой кислоты и молекулярные механизмы их действия

• Автор: Марков, Андрей Владимирович
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 177 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ТРИТЕРПЕНОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ - ПЛАТФОРМА ДЛЯ СИНТЕЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ АГЕНТОВ: МЕХАНИЗМ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ДЕЙСТВИЯ И ХИМИЧЕСКИЕ МОДИФИКАЦИИ, ПРИВОДЯЩИЕ К УСИЛЕНИЮ ИХ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ И БИОДОСТУПНОСТИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1 Природные тритерпены и их фармакологические свойства

1.1.1 Противовирусная активность тритерпеноидов

1.1.2 Противовоспалительная активность тритерпеноидов

1.1.3 Противоопухолевая активность тритерпеноидов

1.1.4 Антиангиогенная активность тритерпеноидов

1.1.5 Антиметастатическая активность тритерпеноидов

1.2 Полусинтетические производные тритерпеноидов

1.3 Механизмы клеточной гибели
1.3.1 Некроз
1.3.2 Аутофагия
1.3.3 Апоптоз
1.3.3.1 Индукторная фаза апоптоза
1.3.3.2 Эффекторная фаза апоптоза
1.3.3.3 Фаза деградации
1.4 Влияние тритерпеноидов на жизнеспособность опухолевых клеток
1.4.1 Внутриклеточные сигнальные пути, запускаемые действием тритерпеноидов
1.4.1.1 PI3K7Akt сигнальный путь
1.4.1.1.1 Протеинкиназа mTOR
1.4.1.1.2 Транскрипционный фактор NF-kB
1.4.1.1.3 Транскрипционный фактор БОХОЗа
1.4.1.2 МАР киназный сигнальный путь
1.4.1.2.1 Протеинкиназа ERK
1.4.1.2.2 Протеинкиназа р
1.4.1.2.3 Протеинкиназа JNK
1.5 Пролекарства тритерпеновой природы
1.5.1 Увеличение растворимости тритерпеновых соединений

1.5.1.1 Увеличение гидрофильности тритерпеновых соединений
1.5.1.2 Увеличение гидрофобности тритерпеновых соединений
1.5.2 Опухоль-направленные пролекарства тритерпеновой природы
1.6 Направленная химическая модификация молекулы ГЛК
1.6.1 Модификации кольца А
1.6.1.1 Модификация по положению СЗ
1.6.1.2 Изменение структуры кольца А
1.6.1.3 Введение дополнительных колец
1.6.1.4 Введение в кольцо А акцептора Михаэля
1.6.2 Модификация кольца С
1.6.3 Модификация кольца Е
ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
2.1 Материалы и методы
2.1.1 Реактивы и препараты
2.1.2 Обрудование
2.1.3 Клеточные линии
2.1.4 Лабораторные животные, опухолевые модели и вирусы
2.1.5 Производные глицирретовой и дезоксихолевой кислот
2.1.6 Растворы и буферы, использованные в работе
2.2 Методы
2.2.1 Ведение культур клеток
2.2.2 Подсчет количества живых клеток при помощи окраски трипановым синим
2.2.3 Определение жизнеспособности клеток под действием производных (МТТ тест)
2.2.4 Исследование апоптоза клеток с помощью ApopNexin FITC Apoptosis Detection Kit
2.2.5 Оценка мембранного потенциала митохондрий
2.2.6 Исследование клеточного цикла
2.2.7 Анализ морфологии ядер с помощью флуоресцентной микроскопии
2.2.8 Исследование активации каспазного каскада с помощью CaspACE FITC-VAD-FMK In Situ Marker
2.2.9 Полнотранскриптомный анализ экспрессии генов на микрочипах
2.2.10 Приготовление липосом, нагруженных солоксолон метилом
2.2.11 Исследование цитотоксичности высокодисперсной композиции солоксолон метила с ПЭГ

2.2.12 Исследование острой токсичность высокодисперсной композиции солоксолон метила с ПЭГ на мышиной модели in vivo
2.2.13 Приготовление микроэмульсий солоксолон метила с солюбилизаторами Твин-80 и Кремофор-EL
2.2.14 Исследование влияния солоксолон метила на рост карциномы Кребс-2 ex vivo
2.2.15 Исследование противоопухолевой активности in vivo
2.2.16 Оценка уровня синтеза оксида азота макрофагальными клетками J-774, активированными липополисахаридом (ЛПС)
2.2.17 Оценка антиэкссудативной активности на модели острого воспаления, вызванного гистамином
2.2.18 Оценка цитопатического действия вируса гриппа на клетки MDCK-L9 с помощью технологии xCelligence
2.2.19 Определение титра вируса гриппа на клетках по реакции окрашивания инфекционных фокусов (метод ФОЕ)
2.2.20 Оценка влияния препарата на репродукцию вируса гриппа А
2.2.21 Оценка вирулицидного действия
2.2.22 Получение раствора эритроцитов
2.2.23 Титрование вируса гриппа А по реакции гемагглютинации (РГА)
2.2.24 Исследование влияния солоксолон метила на адсорбцию вируса к мембране клетки
2.2.25 Исследование активности нейраминидазы вируса гриппа А
2.2.26 Оценка влияния времени добавления солоксолон метила на репродукцию вируса..
2.2.27 Исследование влияния солоксолон метила на способность вируса гриппа связываться с клеткой
2.2.28 Исследование влияния солоксолон метила на проникновение вируса гриппа в клетки
2.2.29 Оценка противовирусной активности in vivo на модели гриппозной пневмонии мышей
2.2.30 Определение концентрации ИЛ-6, вырабатываемого клетками А549 в результате вирусной инфекции
2.2.31 Статистический анализ
ГЛАВА 3. СПЕКТР БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ГЛИЦИРРЕТОВОЙ КИСЛОТЫ (РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ)
3.1 Оценка цитотоксичности новых производных ГЛК
3.1.1 Первичный скрининг производных ГЛК
3.1.2 Анализ взаимосвязи «структура-активность» производных ГЛК

стимулирует их прикрепление к клеточной мембране, после чего PDK1 фосфорилирует Akt по остатку треонина Thr308. Akt также фосфорилируется белковым комплексом mTORC2 по остатку серина Ser473. Активированная таким образом Akt открепляется от клеточной мембраны и перемещается в цитоплазму и ядро клетки, где фосфорилирует широкий ряд ферментов и транскрипционных факторов, регулируя тем самым различные клеточные функции (Рис.4) [247].
В большом количестве работ показана способность тритерпенов ингибировать PI3K/Akt сигнальный путь в опухолевых клетках. Данные соединения подавляют активацию PI3K [101] и вызываемое ею фосфорилирование Akt [58, 101, 135, 203, 210, 215, 217, 218, 221, 230, 235, 237-242], однако механизм данного процесса до конца не изучен. Ингибирование PI3K/Akt оси может быть опосредовано фосфатазами PTEN и PHLPP1, способными конвертитровать Р1Р3 обратно в PIP2, подавляя, таким образом, активацию Akt, и дефосфорилировать активную форму Akt, соответственно (Рис. 4). Показано, что уровень экспрессии данных фосфатаз увеличивается при действии урсоловой кислоты [217] и CDDO-Me [242]. Также активацию PI3K и Akt может ингибировать кавеолин-1, экспрессия которого увеличивается при действии олеаноловой кислоты [363]. Наиболее важными эффекторами PI3K/Akt сигнального пути являются протеинкиназа mTOR и транскрипционные фактор NF-kB и FOX03a.
Рецепторная
тирозинкиназа
- Пролиферация;
- Выживание;
- Миграция;
- Деление;
- Дифференциация.
Рис. 4. Схематическое изображение РІЗК/АІН сигнального пути.
1.4.1.1.1 Протеинкиназа тТОЯ
Основной физиологической функцией mTOR является стимулирование синтеза белка в клетках, что приводит к повышению их пролиферации. Активная форма mTOR осуществляет