Обнаружение NMDA-рецепторов в лимфоцитах и их характеристика

• Автор: Машкина, Анна Петровна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 114 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1.1. Клетки иммунной системы и пх рецепторы

1.1.1. Общие представления об иммунной системе

1.1.2. Клетки иммунной системы

1.1.3. Поверхностные маркеры субпопуляций лейкоцитов

1.1.4. Активация лимфоцитов

11.4.1. Роль кальция в активации лимфоцитов

1.1.4.2. Участие А ФК в активации лимфоцитов

Глава 1.2. Воспаления центральной нервной системы
1.2.1. Иммунопривилегированность
1.2.2. Стадии воспаления
1.2.3. Взаимосвязь нервной и иммунной систем
1.2.4. Влияние цитокинов на метаболизм глутамата в мозге
Глава 1.3. Распространение и Функции глмамагных рецепторов
1.3.1. Классификация глутаматныхрецепторов
1.3.2. NMDA-рецептор: структура и функци
1.3.2.1. Структура NMDA-рецептора: субъединичный состав
и лигандная специфичность
1.3.2.2. Десенсибилизация
1.3.2.3. Фосфорилирование
1.3.2.4. Встраивание в мембрану и формирование функционально активного рецепторного комплекса
1.3.2.5. Экзайтотоксичность
Глава I. 4. Глутаматные рецепторы лимфоцитов
Цель и задачи исследования
Научная новизна и практическая значимость работы
Положения, выносимые на защиту
II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
11.1. Материалы и методы исследования
11.1. Объекты исследования

//.7.7. Отбор крови
IJ.1.2. Выделение лимфоцитов
II.1.3 Первичная культура периферических лимфоцитов
II.1.4. Модель индуцированного компрессионного повреждения
спинного мозга у крыс
II.2. Используемые подходы и регистрируемые параметры
II.2.1.Определение экспрессии гена GRI
112.1.1. Выделение РНК и обратная транскрипция
II.2.2.2. Полимеразная цепная реакция
II. 2.3.3. Электрофорез ДНК
11.2.2. Проточная цшпометрия
11.2.3. Определение внутриклеточного уровня АФК
11.2.4. Определение доли мертвых клеток
11.2.5. Илшунофенотипирование
11.2.6. Определение экспрессии NRl-субъединицы NMDA-рецептора
11.2.7. Количественное определение интерферона-у
11.2.8. Определение количества клеток продуцирующих интерферон-у
/7.2.9. Приготовление и окрашивание срезов спинного мозга для микроскопии
П.З. Статистическая обработка результатов
Щ. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЯ
III.1. Определение экспрессии мРНК к глугаматным рецепторам крысы
111.2. Определение экспрессии NRl-субъединицы NMDA-рецепторного комплекса на поверхности лимфоцитов
111.2.1. Идентификация NRl-субъединицы с помощью моноклональных антител
111.2.2. Влияние NMDA на экспрессию NR1 в лимфоцитах человека
111.3. Исследование действия NMDA на функциональное состояние лимфоцитов
111.4. Распределение клеток в субпопуляциях лимфоцитов
111.5. Влияние NMDA на продукцию IFN-y лимфоцитами человека
111.6. Характеристика Т-лимфоцитов в очаге воспаления, созданном механическим повреждением ткани спинного мозга
111.7. Т-лимфоциты, активированные “in vivo” в условиях спинномозговой травмы, экспрессируют NRl-субъединицу NMDA-рецептора

Список сокращений
АФК - активные формы кислорода
ИЛ - интерлейкин
КФГ - (8)-4-карбоксифенилглицин
ГЦ - гомоцистеин
ГЦК - гомоцистеиновая кислота
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ТкР - Т-клеточный рецептор
ФХЭ-А - анафилактический фактор хемотаксиса эозинофилов
ЦНС - центральная нервная система
3-HPG - 3-гидроксифенилглицин
ACPD - 1-аминоциклопентан-1,3-дикарбоксилат
АМРА - а-амино-3 гидрокси-метил-4-изоксазолпропионовая кислота
Caspase - Cysteine-requiring Aspsrtate Protease
CD - кластер дифференциации
CSI - Spinal Cord Injury
D-AP5 - D-2 амино-5-фосфорновалериат
DCF - дихлорфлуоресцеин
DCFH2-DA - 2’,7’-дихлорфлуоресцеин диацетат
ЕААТ - Excitatory amino acid transporter
ELISA - Enzyme linked immuno-sorbent assay
FITC - флуоресцеинизотиоцианат
FL1 - логарифмическая ось зелёной флуоресценции
FL2 - логарифмическая ось красной флуоресценции
FL3 - логарифмическая ось оранжевой флуоресценции
IFN-y - interferon (интерферон) у
L-AP4 - L-амино 4-фосфонобутират
МК-801 - TpaHC-S-метил-ІОЛ 1-дигидро-5н-бснзо[а,й]циклогіентен-5,10-иминмалеат NADPH - никотинадениндинуклеотидфостат NK - натуральные киллеры

В роли антагонистов глутаматных рецепторов выступают разнообразные вещества с разньми механизмами действия. Наиболее известными конкурентными антагонистами NMDA-рецепторов является 0-2-амино-5-фосфоновалерат (D-AP5) и 0-2-амино-5-фосфоногсптоноат (D-AP7). Более специфичен антагонист МК-801, блокирующий ионный канал NMDA-реценторов [Ашмарин, 1996]. В качестве антагониста метаботропных рецепторов III группы используют КФГ (карбоксифенилглицин) [Jones et al., 1993].
Благодаря тому, что различные классы глутаматных рецепторов различаются сродством к глутамату, а также подвержены сложному взаимному влиянию, ответ нейрона на глутамат весьма вариабелен. Однако именно вследствие этой особенности в мозге становятся возможными такие сложные процессы, как запоминание и обучение.
Взаимодействие между глутаматными рецепторами осуществляется несколькими путями. Метаботропные рецепторы, благодаря изменению метаболического статуса клеток, оказывают влияние на ионотропные глутаматные рецепторы и связанные с ними каналы. Считается, что изменение активности ионотропных глутаматных рецепторов (iGluRs) под влиянием метаботропных глутаматных рецепторов (mGluRs) лежит в основе модуляции активности глутаматергических синапсов в гиппокампе. [Skeberdis et al., 2001а] на модели ооцитов лягушки Xenopus показали, что при возбуждении mGluRs I группы активируется фосфолипаза С, вызывая усиление активности NMDA-рецепторов, что может играть важную роль в синаптической передаче.
В элекгрофизиологических исследованиях было показано, что взаимодействие между метаботропными и ионотропными рецепторами регулирует активность нейрональных сетей [Krieger et al., 2000]. Помимо этого, метаботропные рецепторы обладают протекторным действием на нейроны благодаря снижению нейротоксического эффекта, вызываемого избыточной активацией ионотропных рецепторов [Болдырев, 2000].