Воздействие фрагментов рибосомных генов, накапливающихся во внеклеточной ДНК, на свойства мезенхимальных стволовых клеток человека

• Автор: Чвартацкая, Оксана Викторовна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 113 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Принятые сокращения и аббревиатуры

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Биологические свойства и функции внеклеточной ДНК

человека

1.1.1 Концентрация внеклеточной ДНК в биожидкостях

1.1.2 Размеры фрагментов внеклеточной ДНК

1.1.3 Модификация оснований внеклеточной ДНК

1.2 Происхождение фрагментов внеклеточной ДНК в организме

1.3 Микроокружение внеклеточной ДНК

1.4 Взаимодействие внеклеточной ДНК с
клетками
1.4.1 Белки семейства «toll-like» рецепторов (TLR)
1.4.1.1 Лиганды для белков TLR
1.5 Т1Л19-сигнальный путь и связанные с ним NF-kB-, JNK/p38-,
IRF-сигнальные пути
1.6 Роль цитокинов в организме
1.6.1 Провоспалительные цитокины
1.6.2 Противовоспалительные цитокины
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Выделение и культивирование мезенхимальных стволовых
клеток
2.1.2 Исследование экспрессии клетками поверхностных
белков
2.2 Определение концентрации повторяющейся последовательности
ДНК человека в крови
2.3 Конструирование плазмиды п(рДНК)

Выделение РНК из мезенхимальных стволовых
клеток
Обработка выделенной РНК ДНКазой
Определение концентрации РНК
Выделение ДНК из мезенхимальных стволовых
клеток
Определение концентрации ДНК
Постановка полимеразцой цепной реакции
Проведение реакции обратной транскрипции
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в реальном времени
Иммуногистохимия
Связывание антител с №-кВ
Связывание антител с Т1Л
Иммуноферментный анализ секреции цитокинов
Иммуноферментный анализ секреции цитокина 1Ь-
Иммуноферментный анализ секреции цитокина таТа
Определение активности каспазы
Статистическая обработка результатов
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ
Рецепторы, отвечающие на действие СО-богатой внеклеточной

Определение экспрессии мРНК ТЬЯ9 в мезенхимальных стволовых клетках, при действии на них вкДНК, модельной
п(рДНК) и ДНК Е.соН
Исследование сигнальных путей, активирующихся в мезенхимальных стволовых клетках в ответ на действие
фрагментов п(рДНК)
Кинетика изменения во времени экспрессии мРНК ТЫ19 и адаптера ТЕИ-сигнального пути - МуБ88 в ответ на стимуляцию

3.2.4 3.
мезенхимальных стволовых клеток фрагментами
п(рДНК)
Активация ОТ-кВ Л4К/р38-, 1ЯР- сигнальных путей в ответ на стимуляцию мезенхимальных стволовых клеток фрагментами
п(рДНК)
Транслокация НР-кВ в ядро мезенхимальных стволовых клеток
при действии фрагментов п(рДНК)
П(рДНК) стимулирует увеличение количества мРРГК цитокинов
1Ы0 и ТЫРа
Снижение ферментативной активности каспазы 3 в мезенхимальных стволовых клетках при действии модельных
фрагментов внеклеточной ДНК
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

JNK киназы происходят из 3 генов JNK1, JNK2 и JNK3 и имеют 10 изоформ. JNK1 и JNK2 встречаются во всех клетках и тканях, тогда как JNK3 находится в основном в мозге, и в небольших количествах в сердце.
JNK посредством фосфорилирования модифицируют активность некоторых белков, находящихся в митохондриях или в ядре. Таким образом JNK участвуют в регуляции различных функций клетки. JNK киназы могут регулировать воспаление, уровень активных форм кислорода (АФК) и различные стрессовые факторы.
В результате активации р38 МАРК и киназы JNK транскрипционный фактор NF-кВ освобождается из ингибирующего комплекса и перемещается в ядро, что ведет к экспрессии NO-синтазы, генов цитокинов и других регуляторных факторов воспаления [Kawai et al., 2006]. Вместе с тем, при активации TRAF и IRAK может быть инициирован выброс ИФН-альфа как следствие активации IRF-7 [Kawai et al., 2006].
В результате активируются все основные клеточные функции, связанные с представлением антигенов и развитием фагоцитоза, продукция активных форм кислорода, N0, синтезируются низкомолекулярные медиаторы воспаления и провоспалительные цитокины, включающие интерлейкины: IL-1, IL-6, IL-8, интерфероны I типа, фактор некроза опухоли, хемокины [Kawai et al., 2006; Windheim et al., 2008; Papantonis et al., 2012]. Также активируются цитокины, стимулирующие дифференцировку Thl лимфоцитов - интерлейкины: IL-12, IL-23, IL-27 [Akira et al., 2004; Kawai et al., 2006], что представляет собой своеобразный мостик к развитию специфической иммунной системы, которая распознает антигенные структуры микроорганизмов.
Адаптер TIRAP/Mal в отличие MyD88 связывается с другими областями TIR, но действует как MyD88, вступая во взаимодействия с IRAKI, IRAK4 и TRAF6 [McGettrick et al., 2004]. Участие адаптера TIRAP/Mal обуславливает активацию факторов транскрипции NF-кВ, но