Углеводная специфичность галектинов тандемного типа

• Автор: Вохмянина, Ольга Александровна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 137 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Общая характеристика галектинов

1.2. Галектины тандемного типа

1.2.1. Общая характеристика галектинов тандемного

типа

1.2.2. Структура и доменная организация

1.2.3. Строение углеводсвязывающего сайта К-домена

1.2.4. Строение С-УСД
1.3. Углеводная специфичность галектинов человека
1.3.1. Связывание с незамещенными дисахаридами
1.3.2. Связывание с олиголактозаминами
1.3.3. Взаимодействие галектинов с отрицательно заряженными гликанами
1.3.4. Взаимодействие галектинов с ваШАса- „
терминированными гликанами
1.3.5. Взаимодействие галектинов с
группоспецифическими антигенами крови системы

1.3.6. Влияние линкера на углеводсвязывающую
активность галектинов
1.4. Биологические функции галектинов тандемного типа
1.4.1. Функции внутриклеточных галектинов
1.4.2. Функции галектинов на поверхности клеток

1.4.2.1. Галектины как молекулы межклеточной адгезии
2.4.1. Сорбция галектина на клетки, обработанные ферментами
2.4.2. Сорбция галектинов на клетки, обработанные ингибиторами биосинтеза 14- и О-гликанов
клеток
2.10.Связывание галектинов с клетками, модифицированными неогликолипидами
2.12.1. Сорбция галектинов на пластик и контроль связывания с помощью антител
2.12.2. Связывание галектинов, сорбированных на пластик, с вІус-РАА-Ью!

1.4.2.2. Галектины и иммунная система
1.5. Заключение
2. Материалы и методы
2.1. Реактивы
2.2. Клеточные линии
2.3. Культивирование клеток
2.4. Сорбция галектина на клетки

2.5. Контроль связывания галектинов с клетками
2.6. Исследование локализации галектинов на поверхности
2.7. Взаимодействие клеток, нагруженных галектином, с . аус-РАА-Пио
2.8. Связывание с гликопробами клеток, нагруженных
галектином, после их обработки ферментами
2.9. Выявление гликанов на клетках

2.11. Выявление галектина-4 в супернатанте клеток
2.12. Твердофазный анализ

2.12.3. Связывание галектинов, сорбированных на антитела, с 01ус-РАА-Ыо1
2.12.4. Ингибиторный твердофазный анализ (ТФА)
3. Результаты
3.1. Клеточная система для исследования углеводной специфичности галектинов
3.2. Углеводная специфичность галектинов тандемного типа
3.2.1. Галектин-4 человека
3.2.2. Галектин-8 человека
3.2.3. Птичий галектин
3.2.4. Галектин-9 человека
3.2.5. Галектин-5 крысы
3.3. Изучение углеводной специфичности галектинов в твердофазной системе
3.3.1. И- и С-УСД галектина
3.3.2. И-УСД галектина
3.3.3. И-УСД галектина
3.4. И- или С-доменом связываются галектины с гликанами клетки?
3.5. Выявление гликанов, с которыми предположительно связываются галектины тандемного типа на клетках
3.5.1. Связывание галектинов тандемного типа с клетками после их дегликозилирования
3.5.2. Связывание галектинов с клетками, в которых нарушен биосинтез И- и О-гликанов
3.6. Связывание с гликанами галектинов -4, -8 и -9, нагруженных на клетки после их обработки гликозидазами
3.7. Локализация галектинов -4, -8 и -9 в гликокаликсе клеток

углеводной специфичности ортологов1. Имеющиеся на сегодня немногочисленные данные говорят о том, что такие различия имеются. Например, дисахариды Трр и ТБ, а также олиголактозамины (Ы1)п (где п = 2, 3) связываются с галектином-4 человека, но не мыши [80]. Другой пример, галектин-9 человека связывается с пентасахаридом Форссмана на два порядка выше, чем его мышиный ортолог [66]. В то же время, связывание с гликанами галектинов-8 человека и собаки сравнимо [76], а специфичность единственного тандемного галектина, выявленного у птиц - куриного галектина-8 не исследовалась вовсе.
Наиболее вероятно, что различия в специфичности являются результатом замены ключевых а.о. в активном центре. Например, как уже указывалось выше, А46 и №7, играющие ключевую роль в связывании галектина-9 с Рб-5, у мышиного ортолога заменены на V и 8, соответственно; как следствие сродство галектина-9 мыши к гликану на два порядка ниже [66].
1.3.6. Влияние линкера на углеводсвязывающую активность
галектинов
Как уже было указано выше, два УСД галектинов тандемного типа связаны линкером, богатым остатками пролина. Однако, данных о том, что галектины тандемного типа могут образовывать мультимеры посредством коллагеноподобных участков линкера, также как галектин-3 [84], нет. Многочисленные эксперименты, проведенные с однодоменными формами галектинов, показали, что Ж и С-УСД не способны к димеризации друг с другом [79], поэтому считается, что линкер, соединяя два домена в одну пептидную цепь, ориентирует белок таким образом, чтобы обеспечить
1 Ортологи - изоформы одного белка, образовавшиеся в результате дивергенции
гена в процессе эволюции видов, а следовательно, обладающие сходством в хромосомной локализации